بیان پروتئین نوترکیب hsp20-nef به‌منظور ارزیابی ایمنوژنیسیتی آن در مقابل hiv-1 nef توسط الایزای غیرمستقیم

اهداف: پروتئین nef به عنوان هدف جذاب برای توسعه واکسن درمانی hiv1 در نظر گرفته شده است. به علاوه، خواص ایمنی زایی قوی پروتئین های شوک حرارتی (hsps) منجر به استفاده از آنها به عنوان ایمونومدولاتور و حامل آنتی ژنی برای طراحی واکسن های ساب یونیتی شد. در مطالعه اخیر، بیان پروتئین فیوژن hsp20nef در سیستم بیانی اشرشیا کلی (e. coli) انجام شد و بررسی ایمنوژنیسیتی آن در موش های بالب/سی صورت گرفت.مواد و روش ها: در ابتدا، بیان پروتئین نوترکیب hsp20nef در سویه های باکتری اشرشیا کلی bl21 و rosetta توسط sdspage و وسترن بلات با استفاده از آنتی بادی منوکلونال ضد nef بررسی شد. سپس، تخلیص پروتئین نوترکیب توسط تکنیک رنگ آمیزی معکوس انجام شد. درنهایت، توانایی آن برای القای پاسخ آنتی بادی در مقابل آنتی ژن hiv1 nef با استفاده از elisa غیرمستقیم ارزیابی شد.یافته ها: نتایج ما باند واضح حدود 1230جفت باز مرتبط با فیوژن hsp20nef روی ژل آگارز نشان داد که نشانگر کلونینگ صحیح ژن در وکتور pet28a بود. بیان پروتئین hsp20nef به صورت باند واضح حدود 47کیلودالتون در sdspage و وسترن بلات تایید شد. در سنجش ایمنولوژیکی، پروتئین hsp20nef و نیز پروتئین nef امولسیفیه شده با ادجوانت فروند به طور مهمی سطح igg تام را در مقایسه با گروه های دیگر افزایش دادند. به علاوه، ایمنوژنیسیتی hsp20nef بالاتر از freund rsquo;s adjuvant/nef در رژیم های پروتئینی بود ((p<0/05).نتیجه گیری: پروتئین فیوژن hsp20nef به طور موثری در سیستم پروکاریوتی e. coli بیان شد و به طور مهمی پاسخ آنتی بادی را در مقابل آنتی ژن hiv1 nef القا کرد.

Expression of the Recombinant Hsp20-Nef Protein for Evaluation of its Immunogenicity against HIV-1 Nef using Indirect ELISA

Aims: Nef protein has been considered as an attractive target for the development of therapeutic HIV1 vaccine. Furthermore, strong immunological properties of heat shock proteins (HSPs) led to their use as for subunit vaccine candidates. In the current study, the generation of Hsp20Nef fusion protein was performed in E. , and in BALB/c mice.Materials and Methods: At first, of Hsp20Nef recombinant protein E. BL21 and Rosetta strains by SDSPAGE and western blotting using antiNef monoclonal antibody. Then, the recombinant protein was purified by a reverse staining method. Finally, its potency was evaluated to elicit antibody response against HIV1 Nef antigen using indirect ELISA in mice.Findings: Our data showed a clear band of ~1230bp related to Hsp20Nef fusion on agarose gel indicating the correct gene cloning in pET28a vector. The expression of Hsp20Nef protein was confirmed as a clear band of ~47 SDSPAGE and western blotting. In the immunological assay, the Hsp20Nef protein and also the Nef protein emulsified with Freund rsquo;s adjuvant significantly enhanced the level of total compared to other groups. Moreover, of Hsp20Nef was higher than Freund rsquo;s adjuvant/Nef in protein regimens (p<0.05).Conclusion: The Hsp20Nef fusion protein was effectively expressed in E. and significantly induced antibody response against HIV1 Nef antigen.