طراحی روش غربالگری سریع چهار جهش شایع ژن بتاگلوبین در جمعیت ایران با ‌استفاده از روش منحنی ذوب با تفکیک بالا

اهداف: تالاسمی بتا، یک بیماری خونی و ژنتیکی است، شیوع ناقلین این بیماری در جمعیت ایران بالاست. بررسی غربالگری قبل از ازدواج برای تعیین ناقلین تالاسمی بتا، به تشخیص سریع و قابل اعتماد نیاز دارد. هدف پژوهش حاضر طراحی روش غربالگری سریع چهار جهش شایع ژن بتا گلوبین جمعیت ایران با استفاده از روش ذوب با تفکیک بالا (hrm) بود.مواد و روش ها: در مطالعه تجربی حاضر هشت نمونه از افراد مبتلا و ناقل تالاسمی بتا با ژنوتیپ های (g>a) ivsi110، a) ivsiii (g> (ivsi-5 (g>c و cd36/37 (-t) در شرایط هموزیگوت و هتروزیگوت و یک نمونه کنترل (فرد سالم) انتخاب شدند. بعد از گرفتن خون، استخراج dna با روش نمکی انجام شد. برای اطمینان، نمونه ها به صورت دوتایی ران شدند و دو نمونه کنترل بدون dna نیز به کار رفت. آغازگرها، با کمک نرم افزارهای gene runner 6.0.28، primer express v 3.0.1 3/1) و primer3 v. 0.4.0 طراحی شدند و روش hrm برای تعیین جهش های فوق به کار رفت.یافته ها: بهترین غلظت مناسب dna، 5نانوگرم بر میکرولیتر به دست آمد. در مرحله تفاوت نمودار به وضوح تفاوت منحنی ها در شرایط هتروزیگوت، نرمال و هموزیگوت مشاهده شد. در جهش ivsiiig>a در منحنی ذوب برخلاف انتظار دو قله در نمونه ها دیده شد، علت آن حضور یک پلی مورفیسم در نزدیکی جهش بود.نتیجه گیری: روش hrm قابلیت تشخیص چهار جهش شایع ژن بتاگلوبین را دارد و می تواند بین فرد هتروزیگوت و هموزیگوت و فرد سالم نیز در یک جهش واحد افتراق ایجاد کند. روش hrm توان بالایی داشته و می تواند 96 نمونه dna را در مدت دو ساعت آنالیز کند.