ارزیابی روش ذوب dna مبتنی بر real-time pcrجهت تشخیص انتروکوک فکالیس و انتروکوک فاسیوم در ایزوله های بالینی

سابقه و هدف: کندی و خطای انسانی در روش های معمول جهت تشخیص دوگونه انتروکوک فکالیس و انتروکوک فاسیوم که جزء مهمترین گونه های بیماریزا در انسانمی باشند، وجود روشهای دقیقتر را ضروری کرده است. هدف از این مطالعه طراحی روشی دقیق و سریع با استفاده از تکنیک ذوب dna با روش real time pcr جهت شناسایی و تفکیک این دو گونه از یکدیگر در ایزوله های بالینی می باشد.مواد و روش ها: در این مطالعه تجربی از ایزوله های موجود در بانک باکتریایی گروه میکروب شناسی دانشگاه علوم پزشکی همدان استفاده شد. طراحی پرایمرها با استفاده از نرم افزارهای اختصاصی و انتخاب ژن های diviva برای تشخیص انتروکوک فکالیس وalanine racemase برای تشخیص انتروکوک فاسیوم انجام شد. تشخیص ایزوله ها، با بکارگیری روش real time pcr و معیار قراردادن دمای ذوب dna، مورد ارزیابی قرار گرفت. یافته ها: حساسیت پرایمرهای طراحی شده برای ژنهای diviva (اختصاصی انتروکوک فکالیس) و alanine racemase (اختصاصی انتروکوک فاسیوم) cfu/ml 15 باکتری بودند. اختصاصیت پرایمرهای طراحی شده با استفاده از آنالیز منحنی ذوب دمایی جهت شناسایی انتروکوک فکالیس 76/6 درجه سانتی گراد و جهت شناسایی انتروکوک فاسیوم 80/93 درجه سانتی گراد بود که در مقایسه با ارگانیسم های دیگر اختلاف قابل توجهی را نشان داد.نتیجه گیری: بر اساس این مطالعه، پرایمرهای طراحی شده دارای حساسیت و اختصاصیت مناسبی جهت تشخیص و افتراق گونه های انتروکوک فاسیوم و انتروکوک فکالیس بودند