شناسایی باکتری‌های موجود در صفرای بیماران مبتلا به مشکلات صفراوی و بررسی تولید بیوفیلم در جدایه‌های شایع

زمینه و هدف: عفونت های مختلف در سیستم مجاری صفراوی و تشکیل سنگ از عوامل انسداد جریان صفرا در آن ارگان استریل است. این مطالعه به منظور شناسایی باکتری های موجود در صفرای بیماران مبتلا به مشکلات صفراوی و بررسی تولید بیوفیلم در جدایه های شایع انجام شد.روش بررسی: این مطالعه توصیفی آزمایشگاهی روی 35 نمونه (سنگ و بافت صفرا) جمع آوری شده در شرایط استریل (به روش لاپاراسکوپی) از بخش جراحی بیمارستان امام خمینی تهران طی شش ماه اول سال 1395 انجام شد. نوع سنگ ها به کمک روش های شیمیایی و نوع میکروب ها با استفاده از آزمایشات بیوشیمیایی و مولکولی تعیین شدند. برای جستجوی باکتری ها در نمونه های منفی، dna از بافت کیسه صفرا تخلیص شد و با استفاده از پرایمرهای 1492r وf 27 برای تکثیر قطعه ای از ژن 16srrna الگو قرار گرفت. نوع باکتری در نمونه های مثبت به کمک بانک اطلاعاتی ncbi تعیین شد. شایع ترین جدایه از لحاظ شدت تولید بیوفیلم به کمک روش میکرو تیترپلیت و ژن های درگیر این فنوتیپ ag43(flu) و csgf به روش pcr مورد بررسی قرار گرفت. مقاومت آنتی بیوتیکی آنها با استفاده از روش دیسک دیفیوژن تعیین گردید.یافته ها: تعداد 13 نمونه دارای انواع باکتری شامل 3 جدایه کلبسیلا، 4 جدایه اشریشیا کلی، یک جدایه انتروباکتر، 2 جدایه استافیلوکوکوس اورئوس، 2 جدایه انتروکوک و یک جدایه استرپتوکوکوس بودند. از 23 مورد نمونه صفرا، در 65.7% موارد بااستفاده از روش کشت میکروبیولوژیک، باکتری جدا نگردید؛ ولی هفت باکتری شامل شش سویه کلبسیلا و یک انتروکوک با استفاده از تکثیر 16srrna و تعیین ترادف شناسایی شدند. بنابراین، در مجموع گونه کلبسیلا (47.36%) بیشترین سهم را در عفونت های کیسه صفرا نشان داد. ترکیبات کلسترولی و بیلی روبینی در 98درصد نمونه های حاوی سنگ دیده شد. با وجود آن که وفور کلبسیلا در عفونت های کیسه صفرا (47.36%) بیش از بقیه باکتری ها بود. بیشترین باکتری قابل کشت اشریشیا کلی بود. کلیه اشریشیا کلی های مورد بررسی دارای ژن های عامل ایجاد بیوفیلم بودند؛ ولی شدت تشکیل بیوفیلم در دو مورد از آنها قوی و در دو مورد دیگر متوسط بود. این باکتری ها نسبت به اکثر آنتی بیوتیک ها حساس بودند و به تتراسیکلین، سیپروفلوکسازین و سفتی زیدیم مقاومت های متفاوتی را نشان دادند و به تتراسیکلین مقاوم تر بودند.نتیجه گیری: باکتری های غیرقابل کشت سهم مهمی در عفونت های کیسه صفرا دارند. توانایی بالای ایجاد بیوفیلم در باکتری های شایع جداشده هشداری برای مداقه در تجویز آنتی بیوتیک ها برای از بین بردن این بیوفیلم های عفونی در عفونت های کیسه صفرا را نشان می دهد.

Determination of bacteria in gallbladder of patients with cholelithiasis and evaluation of pathogenic factors of the prevalent isolated bacteria

Background and Objective: Various infections and the formation of stones could be the cause for bile duct obstruction of that sterile organ. Determination of pathogenesis factors and the bacteria involved in infections are important in the prevention of disease, and cares needed following surgery. This study was done to determine the bacteria in the gallbladder of patients with cholelithiasis and evaluation of pathogenic factors of the prevalent isolated bacteria.Methods: In this descriptive laboratory study, 35 samples of gallbladder tissues which contained gallstones were collected under sterile conditions in ldquo;Department of General Surgery of Imam Khomeini Hospital rdquo;, Tehran, Iran during 2016. The stone types were analyzed and decomposed by chemical procedures, and the bacteria existed in the tissues were also identified using biochemical experiments. The tissues with negative results in microbiological studies were looked for any contaminating bacteria, applying the DNA extracted from gallbladder tissue as a template using F27 and R1492 as the primers for PCR (Polymerase Chain Reaction) amplification of 16SrRNA gene. Those with the positive results of microbiological tests were subjected to the DNA sequencing following gel purification and blasted against the NCBI gene database. The most frequently isolated bacteria were studied according to the intensity of biofilm formation, using the microtitre plate method. CsgF and Ag43 (Flu), the genes involved in the induction of such phenotype were also analyzed in this study. The antibiotic resistance assay of the isolates was performed using disc diffusion procedure.Results: Thirteen out of thirty five samples of postsurgery gallbladder tissues were found to be infected by different bacteria, including: Klebsiella (3 cases), Escherichia coli (4 cases), Enterobacter (1 case), Staphylococcus aureus (2 cases), Enterococci (2 cases), and Streptococcus (1 case). In 23 out of 35 samples (65.7%), no bacteria could be isolated using microbiological methods. However, in seven out of 23 samples, the amplified 16SrRNA had an indication of Klebsiella (6 cases) and Enterococcus (1 case) isolates. Therefore, the most prevalent genus in gallbladder infections was Klebsiella (47.36%). Chemical analysis showed that the highly frequent compound of gallstones (98%) were of cholesterol and bilirubin. Escherichia coli with fourcases were the highest culture growing isolated bacteria, in all of which, the biofilm formation genes were present. In the two out of four Escherichia coli isolates the intensity of biofilm formation was high. Although, in the remaining two isolates was medium. While, they were found to be sensitive to the most of the antibiotics, they showed resistance to Tetracycline, Ciprofloxacin and Ceftazidime in different ranges.Conclusion: The present study provided evidence that noncultural bacteria are hihly present in gallbladder infections. The high potential of the commonly isolated bacteria in biofilm formation should be taken as a warning to follow the precise protocol of antibiotic prescription for treatment of gallbladder infections.