اثر هرسپتین نوترکیب بر رشد سلول‌های سرطانی پستان

زمینه و هدف: سرطان پستان یکی از شایع ترین انواع سرطان در میان زنان است . مولکول her-2 به عنوان گیرنده تیروزین کینازی از خانواده گیرنده های رشد عامل اپیدرمی، عامل اصلی سرطان است. مولکول پروتئینی هرسپتین که یک آنتی بادی ضد her-2 است؛ می تواند نقش مهمی در تشخیص و درمان سرطان پستان داشته باشد. این مطالعه به منظور ساب کلون کردن ژن هرسپتین و سپس بیان در سیستم پروکاریوتی (e.coli) و تولید هرسپتین نوترکیب به منظور استفاده در درمان سرطان پستان انجام شد.روش بررسی: در این مطالعه توصیفی آزمایشگاهی ژن هرسپتین از سازه سنتزی با روش هضم آنزیمی جدا و درون وکتور بیانی pet28a انتقال داده شد. زیر همسانه سازی ژن موردنظر با استفاده از pcr و هضم آنزمی تایید گردید. پس از انتقال وکتور نوترکیب به میزبان e.coli bl21 de3 ، با استفاده از القاگر iptg ژن نوترکیب هرسپتین بیان شد. پروتئین نوترکیب با استفاده از sds-page ارزیابی و تخلیص با ستون کروماتوگرافی میل ترکیبی نیکل انجام شد و در نهایت توسط وسترن بلاتینگ با استفاده از آنتی بادی ضدهیستیدین تایید شد. میزان کشندگی و زنده ماندن سلول ها در مجاورت با هرسپتین نوترکیب با روش mtt بررسی شد.یافته ها: پس از ساب کلونینگ ژن هرسپتین، pcr و هضم آنزیمی، قطعه 741 جفت بازی ژن هرسپتین را تایید کرد. بیان پروتئین نوترکیب هرسپتین و ارزیابی آن بر روی ژل sds-page اندازه حدود 27 کیلودالتون را تایید کرد. پروتئین نوکیب با استفاده از آنتی هیستیدین نیز تایید شد. پروتئین خالص شده در مجاورت با لاین سلول skbr3 توانایی متوقف کننده رشد سلول های سرطانی را داشت.نتیجه گیری: با توجه به این که آنتی ژن her-2 به وفور بر سطح سلول های سرطانی پستان بیان می شود؛ پروتئین هرسپتین می تواند به عنوان یک آنتی بادی بازدارنده عمل نموده و رشد سلول های سرطانی پستان را مهار کند.

Effect of recombinant Herceptin on the growth of breast cancer cells

Background and Objective: Breast cancer is one of the most common types of cancer among women. HER-2 molecule as the receptor of tyrosine kinase from the family of epithermal growth factor is a major cause of cancer. The Herceptin protein molecule, which is an antiHER-2 antibody, can play an important role in the diagnosis and treatment of breast cancer. This study was done to subcloning of Herceptin gene, expression in the prokaryotic system (E.coli) and produce Herceptin recombinant protein for use in the treatment of breast cancer.Methods: In this descriptive - laboratory study, Herceptin gene from synthesized construct was isolated by enzyme digestion, and then subcloned to the expression vector pET28a. Subcloning of the gene was confirmed using PCR and enzyme digestion. After transferring the vector into E.coli BL21 DE3, expression of the recombinant Herceptin gene was induced by IPTG. The recombinant protein was evaluated by SDSPAGE and purified with NiNTA column chromatography and finally verified by western blotting using antihistidine antibody. The survival of cells adjacent to recombinant Hercaptin by MTT was investigated.Results: Following the subcloning of the Herceptin gene, PCR and enzyme digestion, the 741 fragment of the Herceptin gene was confirmed. Confirmation of Herceptin's recombinant protein and its evaluation on SDSPAGE gel about 27 kDa was done. The recombinant protein was also confirmed with antihistidine tag. The purified protein adjacent to the SKBR3 cell line was able to block the growth of cancer cells.Conclusion: Regarding the expersion of HER-2 antigen on surface of breast cancer cells, Herceptin can act as antibody blocker and it arrests the growth of breast cancer cells.