همسانه‌سازی، بیان و بررسی اثر ضد میکروبی پپتید نوترکیب (cbd)2-drsb1 بر میکروارگانیسم‌های بیماری‌زای انسانی

زمینه و هدف: به دلیل افزایش مصرف آنتی‌بیوتیک‌ها و گسترش مقاومت‌های میکروبی، دستیابی به عوامل ضد میکروبی موثر جدید امری اجتناب ناپذیر است. یکی از راههای مقابله با طیف وسیعی از بیماری‌زاها، بیان پپتیدهای ضد میکروبی قوی است که بخشی از سیستم ایمنی ذاتی همه موجودات زنده محسوب می‌شوند. پپتید درماسپتین b1 یک پپتید کاتیونی قوی با اثرات ضد میکروبی بسیار بالا است.مواد و روش‌ها: در این مطالعه توالی کدکننده‌ پپتید درماسپتین b1 از قورباغه فیلومدوسا بایکالر به دو تکرار پشت سر هم از دمین اتصال به کیتین پروتئین avr4 قارچ کلادوسپوریوم فلاوم متصل و سازه ژنی (cbd)2drsb1 پس از همسانه‌سازی در ریشه‌های موئین توتون بیان شد. بیان پپتید نوترکیب به کمک روش‌های مولکولی مورد تایید قرار گرفت. اثرات ضد میکروبی این پپتید نوترکیب بر باکتری‌های اشریشیا کولای، سودوموناس آروژینوزا، استافیلوکوکوس اورئوس، انتروکوکوس فکالیس، باسیلوس سوبتیلیس در محیط آزمایشگاهی مورد ارزیابی قرار گرفت.یافته‌ها: نتایج نشان داد که عصاره پروتئین کل از کلون‌های تراریخت ریشه‌های موئین، اثرات ضد میکروبی معنی‌داری (05/0>p) بر رشد باکتری‌های بیماری‌زا داشتند. نتایج تعیین شاخص mic نشان داد که جهت بازدارندگی از رشد باکتری‌های گرم منفی غلظت دو برابری از پپتید نوترکیب (cbd)2drsb1 در مقایسه با باکتری‌های گرم مثبت مورد نیاز بود. نتیجه‌گیری: شواهد این مطالعه نشان داد که بیان و تولید پپتید نوترکیب (cbd)2drsb1 در سیستم ریشه‌های موئین می‌تواند راهکاری جهت تولید یک داروی ضد میکروبی جدید باشد.

Cloning, expression and antimicrobial activity of a recombinant (CBD)2DrsB1 peptide against human microbial pathogens

New and effective antimicrobial agents are inevitable because of the increased use of antibiotics and spread of microbial resistance. The expression of antimicrobial peptides that are part of the inherent immune system of all organisms, is a novel approach of confronting a wide range of pathogens. Among the wide range of antimicrobial peptides, Dermaseptin B1 is a potent cationic peptide with strong antimicrobial activity. In this study, Dermaseptin B1 (DrsB1) coding sequence from Phyllomedusa bicolor frogs was fused to a tandem repeat of a chitinbinding domain (CBD) from Cladosporium fulvum Avr4 effector protein and expressed in tobacco Hairy Roots (HRs). The expression of recombinant (CBD)2DrsB1 peptide was confirmed, using molecular methods and its antimicrobial activity was evaluated against Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis and Bacillus subtilis bacteria. The results of antimicrobial activity analysis demonstrated that the recombinant protein had a significant (P