تاثیر میتومایسین c و همکشتی با سلول های فیبروبلاست و کومولوس بر بلوغ آزمایشگاهی اووسیت های نابالغ موش سوری

سابقه و هدف: میتومایسین c که به منظور جلوگیری از تکثیر سلول های همکشتی در کشت سلول به کار می رود، ممکن است با تاثیر مخرب خود بر این سلول ها نهایتاً اثرات نامطلوبی بر بلوغ اووسیت ها بگذارد. این مطالعه با هدف بررسی تاثیر میتومایسین و همکشتی سلول های فیبروبلاست و کومولوس بر بلوغ آزمایشگاهی اووسیت های نابالغ موش انجام گرفت.مواد و روش ها: در این مطالعه تجربی، اووسیت های مرحله وزیکول زایا به دست آمده از موش های سوری در محیط amem تکمیل شده با fsh،hcg ، سرم جنینی گاوی، پنی سیلین و استرپتومایسین در گروه های ذیل کشت شدند: گروه کنترل و گروه های آزمایشی 1: همکشتی با سلول های کومولوسی، 2: همکشتی با فیبروبلاستی جنینی موش، 3 همکشتی با سلول های کومولوسی تیمار شده با میتومایسین c، 4 همکشتی با فیبروبلاست جنینی موش تیمار شده با میتومایسین c. پس از 24 ساعت، تعداد اووسیت های بالغ نشده، متافاز ii، gvbd و دژنره شده با استفاده از میکروسکوپ معکوس بررسی شد. آنالیز واریانس و مقایسه میانگین ها با استفاده از آزمون tukey انجام گرفت.یافته ها: درصد اووسیت های مرحله وزیکول زایا (75/2 ±24) و متافاز ii (28/2 ±51) در گروه کنترل با اختلاف معنی داری به ترتیب بیش تر از 25/2 ±8 و 29/2 ±10 و 28/2 ±10 و19/1 ±11 و کم تر از 34/2 ±64 و 62/2 ±63 و 86/2 ±62 و 47/2 ±62 همه گروه های آزمایشی بود. با این حال، بین گروه های آزمایشی اختلاف معنی داری مشاهده نشد.استنتاج: همکشتی با سلول های فیبروبلاست و کومولوس باعث بهبود بلوغ آزمایشگاهی اووسیت های نابالغ گردید و با توجه به عدم وجود اختلاف معنی دار بین گروه های آزمایشی می توان حذف بخش غیرفعال سازی سلول های مذکور با میتومایسین را از پروتکل های رایج پیشنهاد نمود.

Effect of Mitomycin C and Co-culture with Fibroblast and Cumulus Cells on In vitro Maturation of Immature Mouse Oocytes

Background and purpose: Mitomycin C (MMC) is used as an antiproliferative agent for feeder cells in cell culture. It may induce destructive effects on these cells and eventually on oocytes maturation. This study was conducted to investigate the effect of MMC and coculturing with fibroblast and cumulus cells on in vitro maturation (IVM) of mouse immature oocytes.Materials and methods: In this experimental study, germinal vesicle oocytes (GV) obtained from NMRI mature female mice were cultured in alpha;MEM supplemented by FSH, hCG, fetal bovine serum (FBS), penicillin and streptomycin, at 37 deg;C and 5% CO2 in following groups: a control group and four experimental groups; 1 ndash; cocultured with cumulus cells, 2 ndash; cocultured with mouse embryonic fibroblast (MEF) cells, 3 cocultured with cumulus cells treated with MMC, and 4 cocultured with MEF treated with MMC. After 24 hours, number of GV, GVBD, MII and degenerated oocytes were determined using invert microscope. Data were analyzed using ANOVA with Tukey test.Results: The percentages of GV (24 ±2.75) and MII (51 ±2.28) oocytes in control group were significantly higher (8 ±2.25, 10 ±2.29, 10 ±2.28, 11 ±1.19) and lower (64 ±2.34, 63 ±2.62, 62 ±2.86, 62 ±2.47) than those in all experimental groups, respectively. Nevertheless, no significant difference was observed between experimental groups.Conclusion: Coculturing with fibroblast and cumulus cells promoted in vitro maturation of immature oocytes. There was no significant difference among experimental groups, therefore, removal of monolayer inactivation step by MMC from such protocols can be proposed.