استفاده از روش Fast PCR جهت تشخیص گونه های فاسیولا

سابقه و هدف: انگل‌های شایع کبدی فاسیولا هپاتیکا و فاسیولا ژیگانتیکا از عوامل ایجادکننده فاسیولایازیس بوده، که بیماری جهانی و شایع در انسان و دام می‌باشد. در مطالعه حاضر ما یک روش سریع، آسان و در عین حال دقیق را با استفاده از متد pcr fast جهت تشخیص افتراقی گونه‌های فاسیولا هپاتیکا و فاسیولا ژیگانتیکا معرفی نمودیم.مواد و روش‌ها: 30 ایزوله فاسیولا ی بالغ از کبد گاو و گوسفند از کشتارگاه‌های استان مازندران جدا گردید. ناحیه ژنی its1 با استفاده از پره میکس های amp® fast pcr، در مقایسه با یکی از پره میکس‌های متداول موجود در بازار (accupower® taq pcr premix شرکت bioneer) تکثیر شدند. به علاوه پروفایل pcr rflp جهت تشخیص افتراقی گونه‌های فاسیولا هپاتیکا و فاسیولا ژیگانتیکا با استفاده از آنزیم اندونوکلئازی tasi (tsp509i) انجام گرفت.یافته‌ها: باندی با وزن تقریبی 463 جفت باز برای تمامی نمونه‌های فاسیولا با استفاده از پره میکس sapphire amp® fast pcr فقط ظرف مدت 34 دقیقه پس از تکثیر به دست آمد در حالی که تکثیر اسیدهای نوکلئیک با استفاده از پره‌میکس متداول پس از حدود 1 ساعت و 46 دقیقه کامل شد. تمامی محصولات با آنزیم محدودالاثر (tsp509i tasi) مورد هضم قرار گرفت. پس از هضم در فاسیولا هپاتیکا دو باند 151 و 312 جفت باز و در فاسیولا ژیگانتیکا سه باند 93، 151 و 219 جفت باز تولید شد.استنتاج: واکنش fast pcr با استفاده از پره میکس sapphire amp® در کم‌تر از 3/1 زمان استفاده از سایر پره میکس‌های رایج کامل می‌شود. روش جدید fast pcr با استفاده از پره میکس. sapphire amp® fast pcr یک متد آسان، سریع و در عین حال دقیق بوده که جهت تعیین و تشخیص افتراقی گونه‌های فاسیولادر مطالعات اپیدمیولوژیک در انسان و دام‌های اهلی در مناطق اندمیک فاسیولیازیس کاربرد دارد.