طراحی و ساخت کلون بیان کننده داروی ضد انعقادی دسیرودین (هیرودین) به شکل خارج سلولی در اشرشیا کلی

سابقه و هدف: هیرودین پلی پپتیدی با 65 تا 66 اسید آمینه است که به عنوان داروی ضدانعقادی، از غدد بزاقی زالو ترشح می‌شود. این دارو، مهارکننده بسیار قوی ترومبین می‌باشد بنابراین می‌تواند رقیبی برای هپارین نیز باشد. هدف از این مطالعه، الحاق توالی سیگنال پپتید pelb (توالی سیگنال پپتید pelb روی سکانس پلاسمید pet-22b تعبیه شده است) و بررسی بیان پروتئین نوترکیب هیرودین در اشرشیاکلی می‌باشد.مواد و روش‌ها: ترادف 66 آمینواسیدی واریانت hv3 ژن هیرودین تهیه و به داخل یک وکتور بیانی قوی (pet-22b) انتقال داده شد. برای تسهیل در تخلیص پروتئین از his-tag در ناحیه n-ترمینال ژن استفاده گردید. سیگنال پپتید pelb در ابتدای ژن با هدف ترشح به فضای پری پلاسمیک و محیط کشت درج شد و ساختار پلاسمیدی حاصله توسط سویه origamib (de3) باکتری e.coli بیان شد. در نهایت میزان بیان پروتئین تولیدی در ناحیه سیتوپلاسم، فضای پری پلاسمی و محیط کشت مقایسه گردید.یافته‌ها: نتایج به‌دست آمده نشان می‌دهد که مقدار پروتئین بیشتری در فضای پری پلاسمیک بیان شده و مقدار کمی پروتئین نیز به محیط کشت ترشح گردیده است.استنتاج: با به کارگرفتن وکتورهایی که قادر به انتقال پروتئین هدف به فضای پری پلاسمیک، که محیطی بسیار مطلوب برای شکل‌گیری باندهای دی سولفید و فلدینگ صحیح پروتئین هدف هستند، احتمال تشکیل اینکلوژن بادی‌ها کاهش یافته و تولید پروتئین‌های محلول و فعال افزایش می‌یابد.