همسان سازی و بیان نوترکیب فاکتور بیماریزای EspA مربوط به باکتری E. coliO157:H7

normal 0 false false false en-us zh-tw ar-sa   microsoftinternetexplorer4  چکیدهسابقه و هدف: باکتری e. colio157:h7 جزء پاتوژن‌های روده‌ای می‌باشد که آسیب‌های جدی در دستگاه گوارش پدید می‌آورد. اتصال باکتری در روده بزرگ به واسطه یک سری از فاکتورهایبیماری زا صورت می‌پذیرد که پروتئین‌های ترشحی نوع 3 نیز جزء این فاکتورها دسته‌بندی می‌شوند. در بین پروتئین‌های موجود در سیستم مذکور، پروتئین espa نقش اصلی و مهم را در پیکره شکل‌گیری این سیستم ایفا می‌کند. هدف از انجام این تحقیق همسان‌سازی و بیان این پروتئین به شکل نوترکیبجهت دستیابی به یک ساختار و منبع پایدار برای تولید آن به منظور بررسی‌های آینده به عنوان کاندید واکسن می‌باشد.موادو روش‌ها: طراحی پرایمر اختصاصی برای ژن espa توسط نرم‌افزار oligo7 انجام شد وتکثیر ژن توسط واکنش pcr از روی dna الگو صورت پذیرفت. واکنش‌هایهضم آنزیمی و الحاق ژن درون وکتور بیانی pet28a(+) انجام شد. پس از تایید همسان سازی ژن مورد نظر، بیان نوترکیب پروتئین espa با استفاده از القاءگر مصنوعی iptg صورت پذیرفت. آنالیز وسترن بلات نیز برای تایید پروتئین espa صورت پذیرفت.یافته‌ها: همسان سازی ژن espa درون وکتور pet28a(+) به شکل مناسب بین جایگاه های مربوطه صورت پذیرفت وپروتئین espa پس از القا، بیان نوترکیب مناسب و قابل توجهی رانشان داد. آنتی‌بادیمورد استفاده در وسترن بلات نیز توانست به شکل مناسبی espa را شناسایی کند.استنتاج: ساختار نوترکیب پایدار محتوی ژن espa تولیدگردید که بیان نوترکیب قابل توجهی از پروتئین را نشان داد. بنابراین پروتئین espa را می‌توان در مطالعات آینده برای بررسی میزان ایمن‌سازی علیه e. coli o157:h7 مورد بررسی قرار داد.   /* style definitions */ table.msonormaltable{mso-style-name:table normal;mso-tstyle-rowband-size:0;mso-tstyle-colband-size:0;mso-style-noshow:yes;mso-style-priority:99;mso-style-qformat:yes;mso-style-parent:;mso-padding-alt:0cm 5.4pt 0cm 5.4pt;mso-para-margin:0cm;mso-para-margin-bottom:.0001pt;mso-pagination:widow-orphan;font-size:11.0pt;font-family:calibri,sans-serif;mso-ascii-font-family:calibri;mso-ascii-theme-font:minor-latin;mso-fareast-font-family:pmingliu;mso-fareast-theme-font:minor-fareast;mso-hansi-font-family:calibri;mso-hansi-theme-font:minor-latin;mso-bidi-font-family:arial;mso-bidi-theme-font:minor-bidi;}