کلونینگ و توالی‌یابی پلاسمید کد کننده پروتئین گرانولی متراکم 14 سویه RH توکسوپلاسما گوندیی

سابقه و هدف: بیماری توکسوپلاسموز از بیماری‌های شایع در جهان می‌باشد که حدود یک سوم مردم دارای آنتی‌بادی بر علیه توکسوپلاسما هستند. این بیماری بیشتر به دلیل عوارض وخیم آن، در موارد مادرزادی و نیز بیماران نقص سیستم ایمنی اهمیت دارد. ژن کد کننده پروتئین 14gra می‌تواند به عنوان یک هدف مناسب جهت ساخت dna (deoxyribonucleic acid) واکسن و همچنین طراحی کیت تشخیصی مورد ارزیابی قرار گیرد. هدف از این بررسی، شناسایی و کلون کردن ژن کد کننده پروتئین 14gra سویه rh توکسوپلاسما گوندیی بود.مواد و روش‌ها: در مرحله اول پس از جداسازی تاکی‌زوئیت‌های توکسوپلاسما از مایع صفاقی موش آلوده، dna آن استخراج شد و پس از انجام pcr (polymerase chain reaction)، محصول تکثیر شده بر روی ژل الکتروفورز بررسی گردید. سپس ژن حاصل در وکتور ptg19-t کلون گردید. جهت تایید از روش‌های colony-pcr و هضم آنزیمی به وسیله آنزیم‌های محدود کننده hindiii و ecori استفاده شد. در نهایت ژن 14gra کلون شده در وکتور ptg19-t مورد تعیین توالی قرار گرفت.یافته‌ها: بررسی واکنش pcr بر روی ژل الکتروفورز و همچنین تعیین توالی ژن کد کننده پروتئین 14gra نشان داد که این ژن 1227 جفت بازی با ژن 14gra سویه rh ثبت شده در ژن بانک تشابه کامل داشت. علاوه بر این، با استفاده از روش‌های هضم آنزیمی و colony pcr کلون شدن، ژن 14gra در پلاسمید ptg19-t مورد تایید قرار گرفت.استنتاج: ژن 14gra به طور موفقیت‌آمیزی در پلاسمید ptg19-t کلون شد و این پلاسمید می‌تواند برای مطالعات بعدی جهت ساخت واکسن dna و طراحی کیت تشخیصی مورد استفاده قرار گیرد.