همسانه سازی و بیان ناحیه کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ E در باکتری E.coli

F و e ،b ،a سابقه و هدف: باکتری های کلستریدیوم بوتولینوم هفت نوع نوروتوکسین تولید می کنند که تیپ هایمنجر به بوتولیسم در انسان می شوند. یکی از روش های درمانی بوتولیسم می تواند از طریق مهار فعالیت آنزیمی ناحیهe کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم توسط مهارکننده ها باشد. در این مطالعه، ناحیه کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم تیپبیان شده است. bl21(de سویه ( 3 e. coli همسانه سازی و در باکتری میزبان pet28a در وکتور بیانیژنومی باکتری استخراج گردید. با استفاده از واکنش dna ، مواد و رو شها: به منظور همانندسازی ناحیه مورد نظروارد و وکتور نوترکیب به سلول های pgem-t easy در وکتور pcr توالی مورد نظر تکثیر شد. سپس محصول pcrبه pgem-t easy منتقل گردید. سپس با واکنش الحاق محصول همسانه سازی شده از وکتور dh5? سویه e.coli میزبانانتقال داده bl21(de سویه ( 3 e.coli به باکتری pet28a منتقل شد. در نهایت پلاسمید نوترکیب pet28a وکتور بیانیشد. بیان ناحیه کاتالیتیک در شرایط استاندارد مورد مطالعه قرار گرفت.بیانگر همانندسازی و زیر همانندسازی به ترتیب در وکتورهای pcr یافته ها: نتایج حاصل از برش آنزیمی و واکنشبود. نتایج تعیین توالی نیز صحت حضور توالی مورد نظر را تایید کرد . در نهایت بیان قطعه pet28a و pgem-t easyو آزمایش وسترن بلات تایید گردید. sds-page مورد مطالعه، با استفاده از ژلبا صحت کامل انجام pet28a و pgem-t easy استنتاج: همسانه سازی توالی مورد مطالعه، به ترتیب در وکتورهایبیانگر صحت بیان محصول مورد نظر بود. e.coli bl21(de گرفت. همچنین نتایج بیان و تایید محصول بیانی در باکتری (