مهار همزمان pd-l1 و axl: یک رویکرد نوین در ایمونوتراپی سرطان تخمدان

سابقه و هدف: سرطان تخمدان به عنوان یکی از کشنده‌ترین بدخیمی‌های زنان شناخته می‌شود که به دلیل مقاومت دارویی و نرخ بالای عود بیماری، درمان آن با چالش‌های متعددی همراه است. این مطالعه با هدف بررسی اثرات مهار همزمان دو مسیر سیگنالینگ pd-l1 (درگیر در فرار ایمنی) و axl (یکی از عوامل دخیل در متاستاز و تهاجم تومور) در رده سلولی سرطان تخمدان skov3 انجام پذیرفت.مواد و روش ‌ها: در این مطالعه آزمایشگاهی از نوع تجربی، سلول‌های skov3 در محیط کشت dmem حاوی 10 درصد fbs و آنتی‌بیوتیک کشت داده شدند. ابتدا سطوح بیان پایه ژن‌های pd-l1، axl و مارکرهای emt (شامل vimentin، tgf-β و mmp-9) با استفاده از تکنیک real-time pcr ارزیابی گردید. بهینه ‌سازی شرایط برای مهار pd-l1 با sirna اختصاصی (10 نانومولار، 48 ساعت) و مهار axl با مهار کننده اختصاصی r428 (با تعیین ic50 برابر 9/2 میکرومولار در 48 ساعت) انجام پذیرفت. گروه‌های آزمایش شامل شاهد منفی، مهار منفرد هر مسیر و درمان ترکیبی بودند. ارزیابی زیست‌پذیری سلولی با آزمون mtt و تغییرات بیان ژن‌های هدف با تکنیک real-time pcr بررسی شد.یافته‌ها: آنالیزهای اولیه، میزان بیان پایه ای از ژنهای axl ، vimentin، pd-l1، tgf-β و mmp-9 را در این رده سلولی نشان داد. تیمار منفرد با sirna ضد pd-l1 یا r428 به‌طور معنی‌داری موجب کاهش تکثیر سلولی گردید (0/0007< p). با این حال، درمان ترکیبی، اثر سینرژیستی قابل توجهی در مهار رشد سلولی نشان داد (0/0001< p). هم‌چنین این روش منجر به کاهش معنی‌دار بیان ژن‌های pd-l1، vimentin، tgf-β و mmp-9 گردید (0/0001< p) که نشان‌ دهنده مهار موثر مسیرهای emt و متاستاز می‌باشد.استنتاج: استراتژی مهار همزمان مسیرهای pd-l1 و axl می‌تواند به عنوان یک رویکرد درمانی نوید بخش در مدیریت سرطان تخمدان مقاوم به درمان مطرح باشد. با این حال، مطالعات تکمیلی در مدل‌های پیش ‌بالینی و ارزیابی‌های ایمونولوژیک گسترده‌تر ضروری به نظر می‌رسد. 

dual blockade of pd-l1 and axl in skov3 cell line: a novel strategy for immunotherapy in ovarian cancer

background and purpose: ovarian cancer stands out as one of the most lethal forms of gynecological malignancy, marked by elevated mortality rates primarily due to its frequent late-stage diagnosis and the development of therapeutic resistance. this investigation sought to examine a novel combinatorial approach that targets both pd-l1-mediated immune evasion and axl-driven epithelial–mesenchymal transition (emt) in skov3 ovarian cancer cells.materials and methods: for therapeutic intervention, pd-l1 was silenced using sequence-specific sirna (10 nm; 48-hour transfection), while axl signaling was inhibited using the selective small-molecule inhibitor r428 (ic₅₀ = 2.9 μm at 48 hours). experimental groups included scramble sirna, pd-l1 sirna, scramble sirna combined with r428, pd-l1 sirna combined with r428, r428 monotherapy, and untreated controls. cell viability was assessed using the mtt assay, and gene expression levels were quantified by quantitative real-time pcr (qrt-pcr).results: this investigation demonstrated that skov3 cells intrinsically exhibit basal expression of axl, vimentin, pd-l1, tgf-β, and mmp-9, indicating a baseline metastatic potential and an inherent capacity for immune evasion. both single agents (pd-l1 sirna and r428) exhibited significant anti-proliferative activity (p < 0.0007 and p < 0.0005, respectively). importantly, their combination revealed a synergistic effect, resulting in significantly greater growth inhibition (p < 0.0001). gene expression analysis confirmed marked downregulation of pd-l1 (p < 0.0001) and multiple emt markers following combination treatment, evidenced by a 72% reduction in vimentin, 65% in tgf-β, and 58% in mmp-9 compared to controls.conclusion: the findings showed that simultaneous inhibition of the pd-l1 and axl pathways substantially suppresses cancer progression, resulting in a significant downregulation of emt-regulating genes.