بیان پروکاریوتی آنتی ژن نورآمینیداز ویروس آنفلوانزای a (h5n1)

سابقه و هدف: ویروس آنفلوانزای فوق حاد پرندگان a (h5n1) باعث ایجاد خسارات اقتصادی زیادی در سراسر جهان می شوند و ممکن است در حیوانات درگردش باشد وتوانایی انتشار از انسان به انسان پیدا کند. بنابراین راه‌اندازی تست‌های تشخیصی برای کنترل عفونت آنفلوانزا ضروری است. مطالعات در مورد توالی اسیدهای آمینه پروتئین نورآمینیداز (na) ویروس آنفلوانزا نشان داده است که na ایمنی زا‌ترین پروتئین در حیوانات است و می‌تواند سیستم ایمنی هومورال را تحریک نماید.مواد و روش‌ها: در این مطالعه تجربی ویروس آنفلوانزا (a/indonesia/5/2005: h5n1) در pet21a کلون و در میزبان (bl21)e. coli بیان شد. سپس میزان بیان na از نظر متغیرهای غلظت القاگر iptg و زمان بهینه‌سازی شد.یافته‌ها: نتایج، صحت ساختار pet21ana را نشان داد. باندهای ظاهرشده با وزن مولکولی موردانتظار kdal)38) روی sdspage با وسترن بلات تایید شد که بیانی موفقیت‌آمیز از پروتئین هدف درسویه e. coli bl21 بود. درتجزیه و تحلیل درون رایانه‌ای، درستی اپی‌توپ عمده در ساختار نسخه naتولید شده دراین مطالعه را نشان داد.استنتاج: naنوترکیب جدید می‌تواند به‌طور مستقیم در آزمایشات سرولوژی برای تشخیص استفاده شود. همچنین می‌تواند در معرض تهیه آنتی‌بادی پلی کلونال قرارگیرد، که به عنوان ماده اساسی در تجزیه و تحلیل وسترن بلات و سایر مطالعات ایمونولوژیک مانند elisa، ایمونوسیتوشیمی استفاده شده است.

Prokaryotic Expression of the Influenza A (H5N1) Neuraminidase

Background and purpose: Highly Pathogenic Influenza A(H5N1) viruses cause vast economic losses throughout the world. They may circulate in animals and be able to spread from human to human. Therefore, launching diagnostic tests are highly essential to control the influenza infection. Studies on the amino acid sequence of the neuraminidase (NA) protein of influenza viruses revealed that NA is the most immunogenic protein in na iuml;ve animals which can simply stimulate the humoral immune system well.Materials and methods: Influenza virus NA gene (A/Indonesia/5/2005(H5N1) was cloned into pET21a and expressed in host E. coli (BL21) strains. Then, the expression level of NA protein was optimized for different IPTG inductor concentrations and times.Results: Findings showed the integrity of pET21aNA construct. Emerging bands with the expected molecular weight (38KDal) on SDSPAGE and WB analysis confirmed the successful expression of target protein in E.coli BL21 strain. In silico analysis showed integrity of major epitopes in the structure of fused version of NA produced in this work.Conclusion: The new recombinant NA has the potential to be used directly in serological tests.It could be also used in polyclonal antibody preparation which is employed as an essential materialin western blot analyses and other immunological and serological studies, such as ELISA, immunocytochemistry, and immunohistochemistry.