کشت توامان سلول های بنیادی خونساز و مزانشیمی مشتق شده از خون بند ناف برروی داربست های نانوفیبری پلی ال لاکتیک اسید

سابقه و هدف: امروزه سلول های بنیادی خونساز (hsc) خون بند ناف به دلیل مزایایی چون، در دسترس بودن، توانایی خود نوسازی، تکثیر و تمایز بسیار مورد توجه قرار گرفته اند. محدویت اصلی در استفاده از این سلول‌ها، تعداد کم آن ها در واحد حجم خون بند ناف می باشد. جهت غلبه بر این محدودیت، کشت توام سلول‌های خونساز و مزانشیمی (mscs ) مشتق از خون بند ناف یک راهکار کاربردی می باشد. این مطالعه با هدف تکثیر hsc خون بند ناف به صورت هم‌کشتی با سلول‌های مزانشیمی مشتق از خون بند ناف بر روی محیط سه بعدی پلی‌ال‌لاکتیک اسید پوشیده شده (plla) با پروتئین فیبرونکتین می باشد.مواد و روش‌ها: در این مطالعه تجربی، پس از جداسازی سلول های +cd133 با استفاده از تکنیک macs، تایید خلوص سلول ها با استفاده از فلوسایتومتری انجام شد. سپس سلول ها بر روی بستر نانوالیاف plla کونژوگه با فیبرونکتین (plla-fn ) در حضور mscs (گروه 1)، داربست نانوفیبری plla در حضور mscs (گروه 2) و داربست plla (گروه 3 ) کشت داده شدند. میزان تکثیر، قدرت کلنی‌زایی و میزان زیست سازگاری سلول ها به ترتیب با استفاده از لام هموسیتومتر، تست سنجش کلنی (cfu assay ) و تست mtt در گروه های نامبرده مورد بررسی قرار گرفت.یافته‌ها: سلول‌هایی که بر روی داربست plla-fn به صورت توام با mscs کشت شدند (گروه 1). میزان بیشتری از نشانگر بنیادینگی +cd133 را نسبت به گروه های دیگر دارا می باشند. همچنین قدرت کلنی‌زایی و میزان زیست سازگاری در این گروه در مقایسه با سایر گروه‌ها، افزایش معناداری به همراه داشت (0.05 > p ).استنتاج: نتایج این مطالعه، بهینه بودن سیستم کشت سه بعدی پوشش داده شده با فیبرونکتین به صورت هم کشتی با سلول های مزانشیمی را جهت تکثیر سلول‌های +cd133 با حداقل میزان تمایز اثبات نمود.

Co-culture of Umbilical Cord-derived Hematopoietic and Mesenchymal Stem Cells on Protein-Coated poly-L-LacticAcid Nanoscaffolds

Background and purpose: Umbilical cord blood (UCB) is a source of Hematopoietic stem cells (HSCs) and has received a lot of attention due to its availability, renewal capacity, proliferation rate, and differentiation potential. The main limitation of using these cells is their low quantity in one unite of UCB. To overcome this, HSCs coculturing with UCB derived mesenchymal cells (MSCs) is a practical approach. The purpose of this study was the expansion of HSCs together with UCB derived MSCs on a threedimensional poly L lactic acid coated with fibronectin.Materials and methods: In this experimental study, after isolation of CD133+ from UCB cells using MACS method, the purity of the isolated cells was carried out by flow cytometry. Then, the cells were seeded on PLLA scaffold coated with fibronectin in presence of mesenchymal cells (group I), the PLLA scaffold in presence of mesenchymal cells (group II), and PLLA scaffold (group III). The proliferation rate, colonization potential and biocompatibility of the cells were studied using a hemocytometer, CFU assay, and MTT, respectively.Results: The cells cocuthured with PLLAFn scaffold (group I) had a higher proliferation rate of CD133 stemness marker compared to other groups. Also, the colonization of the cells and scaffold׳s biocompatibility was significantly higher in this group compared to other groups. (P <0.05).Conclusion: The study proved that the optimal 3D culture system in PLLA scaffold coated with fibronectin cocultured with MSCs could reproduce minimum differentiation of CD133 + cells.