کلونینگ و بیان ژن کد کننده راپتری سیزده (rop13) سویه rh توکسوپلاسما گوندیی

سابقه و هدف: توکسوپلاسما گوندیی انگل تک یاخته درون سلولی اجباری می‌باشد. با توجه به شیوع بالای توکسوپلاسموزیس و اهمیت وافر این بیماری در بهداشت عمومی، دستیابی به واکسن موثر و روش های تشخیصی حساس برای این بیماری، بیش از پیش حائز اهمیت است. هدف از این بررسی، شناسایی و کلون کردن ژن کدکننده پروتئین rop13 سویه rh انگل توکسوپلاسما گوندیی و بیان آن در سلول یوکاریوتیک cho بود.مواد و روش‌ها: در این تحقیق، ژن rop13پس از تکثیر با روش pcr، در پلاسمید انتقالی ptg19tکلون و پس از آن در سوش top10 باکتری e.coli ترانسفورم شد. سپس ساب کلونینگ ژن rop13 در پلاسمید بیانی pcdna3 انجام شد. هم چنین پلاسمید pcrop13 در سلول یوکاریوتی cho ترانسفکت شد و به منظور بررسی بیان ژن نوترکیب از روش ifa استفاده شد.یافته‌ها: با استفاده از روش های pcr، تعیین توالی و روش هضم آنزیمی، کلونینگ ژن rop13 در پلاسمیدهای بیانی و انتقالی تایید شد. نتایج تعیین توالی ژن کدکننده rop13 با سویه rh ثبت شده در بانک جهانی ژن تشابه کامل داشت. هم چنین با استفاده از روش ifa، بیان ژن rop13 در سلول یوکاریوتیک cho مورد تایید قرار گرفت.استنتاج: نتایج نشان داد که کلونینگ و ترانسفورم قطعه rop13 در پلاسمید pcdna3با موفقیت انجام شده و در سلول یوکاریوتcho بیان می شود. لذا از این پلاسمید نوترکیب می توان در مطالعات آتی به منظور واکسیناسیون و تشخیص عفونت می توان بهره برد.

Cloning and Expression of Toxoplasma gondii Rhoptry13 Gene in pcDNA3 Plasmid

Background and purpose: Toxoplasma gondii (T. gondii) is an obligatory intracellular protozoan parasite. Toxoplasmosis is highly prevalent and has a great effect on public health, therefor, there is a need for vaccine and sensitive diagnostic procedures. This study aimed at cloning and investigating the expression of ROP13 gene of T. gondii.Materials and methods: In this study, the gene was cloned in pTG19T vector and transferred to a TOP10 strain of E.coli following ROP13 gene amplification using PCR. Then the ROP13 gene was sub cloned in expression plasmid pcDNA3. Also, pcROP13 was transferred to CHO cells and the expression level was evaluated by IFA method.Results: Cloning and sub cloning of ROP 13 gene were confirmed by PCR, sequencing and enzymatic digestion. The gene sequencing showed complete homology with a recorded sequence in the gene bank. Moreover, the expression of ROP13 gene in CHO eukaryotic cells was confirmed by IFA method.Conclusion: The results showed that ROP13 gene was successfully sub cloned into the pcDNA3 expression vector and expressed in CHO cells. Therefore, it can be used in the development of vaccines and in diagnostic tests.