|
|
|
|
بهینه سازی شرایط کشت باکتری اشرشیا کولی برای اصلاح تولید قطعه C-D نوترکیب باکتریورودوپسین
|
|
|
|
|
|
|
|
نویسنده
|
خوانچه زر سیروان ,هاشمی نجف آبادی سمیره ,محمدیان موسی آبادی جعفر ,خلیل زاده رسول ,اسفندیار سمانه
|
|
منبع
|
شيمي و مهندسي شيمي ايران - 1392 - دوره : 32 - شماره : 2 - صفحه:93 -101
|
|
چکیده
|
در بررسی حاضر، بخش cd از پروتیین باکتریورودوپسین (br) در اشرشیاکولی نوترکیب بیان شد. ژن موتانت br با در نظر گرفتن کدون مورد استفاده در اشرشیاکولی ساخته شد. ژن ساخته شده در پلاسمید بیانی pet21a+ در محل های برش nde i و hind iii کلون شده و تحت کنترل پیش بر t7 با موفقیت بیان شد. پروتیین بیان شده با sds page تجزیه شد. اثر دما (a)، زمان القا (b) و زمان فرایند پس از القا (c) روی بازدهی میزان بیان پروتیین (میزان فراورده بر واحد جرم خشک سلول) با استفاده از تجزیه های جدول yates غربالگری شد. سه عامل a ، b و c مهم بودند و با روش تاگوچی بهینه شدند. شرایط بهینه عبارتند از: دما oc 37، زمان القا در 7/0 od600 = و زمان فرایند پس از القا 4 ساعت. همچنین، تولید پیش بینی شده پروتیین در شرایط بهینه، 54 /21% از کل پروتیین سلولی بود. با استفاده از شرایط بهینه به دست آمده، تاثیر افزودن اسیدهای آمینه روی میزان بیان بخش cd نوترکیب باکتریورودوپسین و رشد باکتری در اشرشیاکولی با استفاده از محیط کشت m9 مورد بررسی قرار گرفت. تجزیه و تحلیل جدول yates نشان داد که اسیدهای آمینه آلانین، تریونین و لیوسین دارای اثر بیشتری روی بیان پروتیین بودند و برای افزودن به محیط کشت در فرمانتور در دو سطح گوناگون انتخاب شدند. نتیجه ها نشان دادند که افزودن اسیدهای آمینه باعث افزایش بازدهی تولید پروتیین مورد نظر می شود،اما تاثیر ناچیزی روی رشد باکتری دارد.
|
|
کلیدواژه
|
اشرشیا کولی ,باکتریورودوپسین ,قطعه C-D ,بهینه سازی ,پروتیین نوترکیب
|
|
آدرس
|
دانشگاه تربیت مدرس, تهران، دانشگاه تربیت مدرس، دانشکده مهندسی شیمی، گروه بیوتکنولوژی، صندوق پستی 114 ـ 14115, ایران, دانشگاه تربیت مدرس, تهران، دانشگاه تربیت مدرس، دانشکده مهندسی شیمی، گروه بیوتکنولوژی، صندوق پستی 114 ـ 14115, ایران, دانشگاه تربیت مدرس, تهران، دانشگاه تربیت مدرس، دانشکده مهندسی شیمی، گروه بیوتکنولوژی، صندوق پستی 114 ـ 14115, ایران, دانشگاه تربیت مدرس, تهران، دانشگاه تربیت مدرس، دانشکده مهندسی شیمی، گروه بیوتکنولوژی، صندوق پستی 114 ـ 14115, ایران, دانشگاه تربیت مدرس, تهران، دانشگاه تربیت مدرس، دانشکده مهندسی شیمی، گروه بیوتکنولوژی، صندوق پستی 114 ـ 14115, ایران
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Authors
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|