توالی یابی پیروسکانسینگ و کاربردهای آن در علوم زیستی

تعیین توالی dnaاز مهم ترین روش ها جهت شناسایی ترتیب نوکلئوتید هاست. با توجه به پیشرفت های چشمگیر در این زمینه، روش توالی یابی پیروسکانسینگ (pyrosequencing) ابداع شده است که علاوه بر تعیین توالی dna، کاربردهای متعددی نیز دارد. استفاده از این روش در علم پزشکی و زیست فناوری بویژه در زمینه چندشکلی های تک - نوکلئوتیدی (snp)، شناسایی میکروب های بیماری زا و غیربیماری زا، متیلاسیون dna، شناسایی جهش در ژن های مهم درگیر در بیماری ها است. این روش، بر پایه سنتز است و سیستم آنزیمی استفاده شده در این روش شامل چهار آنزیم منحصر بفرد dna polymerase klenow، atp sulfurylase، luciferase و apyrase است. آزاد شدن نور حاصل از آنزیم لوسیفراز تعیین کننده نوع نوکلئوتید قرارگرفته در زنجیره dna بوده، پیک های مربوط به هر نوکلئوتید در پیروگرم ظاهر می شود. آغازگر استفاده شده در این روش انعطاف پذیر بوده، همین ویژگی منحربفرد، منجر به کارایی بالای آن شده است. عدم استفاده از مواد پرهزینه، برخلاف دیگر روش های توالی یابی، از مزایای دیگر این روش محسوب می شود.

Pyrosequencing and its application in biological science

Determining the DNA sequence is one of the most important techniques for identifying the sequence of nucleotides. In order to the remarkable advances in this field, pyrosequencing technique was created, has several applications in addition to determining the sequence of DNA. The use of this technique is in medical sciences and biotechnology, especially in the field of single nucleotide polymorphism, the identification of pathogenic and non-infectious microbes, DNA methylation, the identification of mutations in the major genes involved in the disease. This technique is based on synthesis and the enzyme system used in this method consists of four unique DNA Polymerase Klenow, ATP sulfurylase, Luciferase and Apyrase enzymes. Releasing of light produced by the enzyme luciferase determines the type of nucleotide present in the DNA chain, and the peaks of each nucleotide appear in the Pyrogram. The primer used in this method is flexible, and this unique feature has led to its high performance.Without using expensive materials, unlike other sequencing methods, is another advantage of this method.