مطالعه مقدماتی آثار سیتوپاتیک ساب‌تایپ‌های 3-1 و 6 بلاستوسیستیس در رده سلولی ht-29

سابقه و هدف: بلاستوسیستیس در حال حاضر یکی از شایع ترین انگل های تک یاخته ای روده ای است که در مدفوع انسان و حیوان یافت می شود. بیماری زایی بلاستوسیستیس و ساب تایپ های آن روی سلول رده گوارشی مشخص نیست. این مطالعه با هدف بررسی تفاوت بین ساب تایپی در القای آپوپتوز سلولی در رده سلولی ht-29 در سال 1399 و در پژوهشکده بیماری های گوارش و کبد دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی انجام شد. روش کار: این بررسی یک مطالعه تجربی روی هفت ایزوله شامل شش ایزوله از ساب تایپ های 1 تا 3 و 6 از 30 ایزوله بلاستوسیستیس جدا شده از افراد دارای علایم بالینی و ساب تایپ های 1 تا 3 از 25 ایزوله بلاستوسیستیس جدا شده از حاملان بدون علامت بود. پس از خالص سازی و شمارش میکروارگانیسم ها، آنتی ژن محلول بلاستوسیستیس از 1×10^5 میکروارگانیسم با استفاده از سه چرخه انجماد و ذوب در نیتروژن مایع و حمام آب 37 درجه سانتی گراد تهیه شد. سپس آنتی ژن محلول ساب تایپ های بلاستوسیستیس با رده سلولی ht-29 به مدت 48 ساعت انکوبه شدند. در نهایت، سرعت تکثیر سلولی با استفاده از روش mtt اندازه گیری شد. برای بررسی تفاوت های آماری در تکثیر سلولی بر اساس زیرگروه ها و همچنین علایم، از آزمون anova یک طرفه همراه با graphpad prism استفاده شد. یافته ها: نتایج به وضوح نشان داد که تمامی ساب تایپ های بلاستوسیستیس در مقایسه با گروه شاهد تیمار نشده (ntc) دارای اثر سیتوپاتیک/ بازدارنده بر رشد سلول های ht-29 بودند. بیشترین میزان اثر ستوپاتیک در ساب تایپ 1جدا شده از افراد بدون علامت (25درصد) و کمترین آثار سایتوپاتیک در ساب تایپ 1 جدا شده از افراد با علامت بالینی (17/11درصد) دیده شد. با این حال، هیچ ارتباط آماری بین ساب تایپ ها و همچنین علایم بالینی با اثر سیتوپاتیک وجود نداشت (0/11 =p-value). نتیجه گیری: یافته های مطالعه حاضر نشان داد که اگرچه از نظر آماری ارتباط معنا داری بین ساب تایپ ها و اثر سیتوپاتیک وجود نداشت، اما به نظر می رسد که ویژگی های ایمونولوژیک میزبان نقش اساسی در پاسخ به بلاستوسیستیس دارد. در واقع، مقایسه بین ساب تایپ ها نشان داد که ساب تایپ 2 آثار خفیف تری را القا می کند. با این حال، بیماری زایی بلاستوسیستیس و تفاوت بین ساب تایپ ها بحث برانگیز باقی مانده است و نیاز به بررسی های مقایسه ای بیشتری دارد.

the study of the cytopathic effects of blastocystis sp., st1-3 and 6 isolated from subjects referred to medical laboratories in ht29 cell line

background and aim: blastocystis sp., is one of the most common intestinal protozoan parasites found in both human and animal fecal samples. the pathogenicity and cytopathic effects of subtypes st1-3 and 6 of blastocystis sp., on gastrointestinal cell line are unclear. this study aimed to investigate the impacts of intra- subtype variations on the apoptosis and cytopathic effects on the ht-29 cell line in 2019 at the research institute for gastroenterology and liver diseases, shahid beheshti university of medical sciences, tehran, iran. methods: this study was an experimental investigation of blastocystis sp., subtypes 1-3 and 6, which were isolated from stool samples of 30 symptomatic and subtypes 1-3 from 25 asymptomatic subjects. after purifying and counting the microorganisms, lysate of blastocystis sp., was prepared from 1 × 105 of the microorganism by three freeze- thaw cycles in liquid nitrogen and a 37°c water bath. then, the lysates of subtypes of blastocystis were co-incubated with the ht-29 cell line for 48h. finally, the cell proliferation rate was measured using an mtt dye assay. for measuring the statistical differences in the cell proliferation based on subtypes as well as symptoms, one- way anova test incorporated with graphpad prism was applied. results: the results clearly indicated that all blastocystis sp., subtypes, compared to non-treated control (ntc), had a cytopathic/inhibitory effect on ht-29 cells growth. the lowest cytopathic effect was seen in st1 isolated from symptomatic patients (17.11%), while the highest was seen in st1 isolated from asymptomatic patients (25%). indeed, st2 showed milder cytopathic effects in the ht-29 cell line compared to st1, 3, and 6. however, there was no statistical correlation between subtypes as well as symptoms and cytopathic effect. conclusion: although there was no statistically significant correlation between subtypes and the cytopathic effect, immunologic responses of hosts seem to play a critical role against blastocystis sp. our findings showed milder effects of blastocystis sp., st2 compared to the other subtypes, however, intra-subtype variations in the pathogenicity of the protist remain unclear, and further investigations are needed.