بررسی تاثیر ال- آرژنین بر القای کلونی‌زایی سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی گوسفند در محیط آزمایشگاه

سابقه و هدف: سلول های بنیادی اسپرماتوگونی دارای توانایی خودنوسازی و تمایز بوده و می توانند صفات ژنتیکی را به نسل بعدی منتقل کنند. بنابراین ایجاد محیط کشت مناسب برای این رده سلولی مهم است. هدف از مطالعه حاضر بررسی تاثیر غلظت های مختلف ال- آرژنین بر کلونی زایی سلول های بنیادی اسپرماتوگونی گوسفند در محیط آزمایشگاه بود.روش کار: نوع مطالعه حاضر تجربی بود. پنج بار نمونه گیری و تکرار آزمایش انجام شد. سلول های اسپرماتوگونی طی دو مرحله هضم آنزیمی از بیضه بره های نابالغ جداسازی شدند. سلول ها به مدت 10 روز در شش گروه آزمایشی کشت داده شدند. برای گروه کنترل، کشت ساده سلول های اسپرماتوگونی در محیط dmem حاوی یک درصد آنتی بیوتیک و 5 درصد fbs انجام شد. در گروه های تیمار 1، 2، 3، 4 و 5 نیز غلظت های مختلف ال- آرژنین (50، 100، 200، 500 و 1000 میکرومول بر لیتر) به ترتیب به محیط کشت اضافه شد. تعویض محیط های کشت هر سه روز یک بار انجام شد. ماهیت سلول ها با رنگ آمیزی ایمنوسیتوشیمی علیه آنتی ژن های pgp9.5 و plzf تایید شد. بلافاصله پس از جداسازی، درصد زنده مانی سلول ها، تعداد و مساحت کلونی های تشکیل شده در روزهای 4، 7 و 10 پس از کشت، توسط میکروسکوپ معکوس ارزیابی شدند. داده ها توسط آزمون واریانس یک طرفه آنالیز شدند. سطح معنا داری 0/05>p در نظر گرفته شد.یافته ها: نتایج نشان دادند که میزان زنده مانی سلول های اسپرماتوگونی پس از جداسازی 1/4 ± 89/28درصد بود. سلول های استخراج شده آنتی ژن های pgp9.5 و plzf را بیان کردند. همچنین در روز 10 پس از کشت و در تیمار 4 (200 میکرومول بر لیتر ال- آرژنین)؛ تعداد (21/1± 160/8) و مساحت (3/1 ± 4/5) کلونی های سلول های اسپرماتوگونی افزایش معنا داری در مقایسه با سایر گروه ها داشت (0/05>p).نتیجه گیری: به نظر می رسد افزودن ال- آرژنین با دوز 200 میکرومول بر لیتر تاثیر مثبتی بر القای کلونی زایی سلول های بنیادی اسپرماتوگونی دارد و می تواند محیط کشت مناسبی را در محیط آزمایشگاه فراهم کند.

evaluation of the effect of l- arginine on induction of ovine spermatogonial stem cells colonization in-vitro

background and aim: spermatogonial stem cells have the ability to self-renewal and differentiation and can transmit genetic traits to the next generation. therefore, establishing an appropriate culture medium for this cell line is important. the aim of this study was to determine the effect of different concentrations of l-arginine on sheep spermatogonial stem cells colony formation in-vitro.methods: an experimental study was conducted. each treatment was replicated five times. spermatogonial cells were isolated from prepubertal lamb’s testis using two-step enzymatic digestion. the cells were cultured for ten days in six groups. in the control group, a simple culture of spermatogonial cells was performed in dmem containing 1% antibiotics and 5% fbs. in the treatment groups 1, 2, 3, 4, and 5 different concentrations of l-arginine (50, 100, 200, 500, and 1000 mol/l), was added to the culture medium, respectively. the culture media were changed every three days. identification of cells was confirmed by immunocytochemical staining against pgp9.5 and plzf antigens. immediately after isolation, the percentage of cells viability, number, and surface area of colonies formed on the 4th, 7th, and 10th days after the culture, were assessed by an inverted microscope. data were analyzed using one- way anova test. p< 0.05 was considered statistically significant.results: the findings indicated that the viability rate of spermatogonial cells after isolation was 89.28 ± 1.4%. isolated cells expressed pgp9.5 and plzf antigens. also, on day 10 after culture and in treatment 4 (200 mol/l l- arginine); the number (160.8 ± 21.1) and surface area (5.4 ± 1.3) spermatogonial cells colonies had a significant increase compared to other groups (p< 0.05).conclusion: it seems that the addition of l- arginine at a dose of 200 mol/l has a positive effect on the induction of spermatogonial stem cells colonization and can provide an appropriate culture medium in vitro.