طراحی و توسعه تکنیک الایزا برای شناسایی igg علیه نایسریا مننژیتیدیس با استفاده از تخلیص آنتی‌سرم

سابقه و هدف: نایسریا مننژیتیدیس یکی از عوامل منجر به مرگ در کودکان کشورهای توسعه یافته است. مننگوکوک بر اساس ویژگی های سرولوژیکی آنتی ژن های کپسولی به 13 سروگروپ طبقه بندی می شوند. شناسایی سریع باکتری در دوره بیماری سبب انتخاب درمان ضد میکروبی در اسرع وقت می شود. هدف از این تحقیق، تهیه آنتی سرم علیه انواع سروگروپ های مننگوکوک با درجه خلوص بالا برای استفاده در تست های تشخیصی است.روش کار: نوع مطالعه تحقیق و توسعه است. سوسپانسیون غیرفعال شده باکتری به خرگوش سفید نیوزیلندی تزریق شد. جمع آوری سرم یک هفته بعد از آخرین تزریق انجام شد. خالص سازی با روش های رسوب دهی، تانژنشیال فلوفیلتریشن و کروماتوگرافی انجام شد. از آنتی سرم تولید شده در تست آگلوتیناسیون و طراحی آزمون الایزا استفاده شد.یافته ها: یافته ها نشان داد که آنتی سرم به دست آمده از لحاظ کیفیت (درجه خلوص بالا، بیشتر از 98درصد) و کمیت (غلظت پروتئین مناسب) از درجه بالایی برخوردار است. تست آگلوتیناسیون با آنتی ژن اولیه به صورت 4+ بود. غلظت های بهینه برای طراحی آزمون الایزا 1 و 80 میکروگرم به ترتیب برای آنتی بادی اولیه و بیوتینیله به دست آمد. نتایج ارزش پیشگویی مثبت یا positive predictive value 100 درصد و ارزش پیشگویی منفی negative predictive value 96 درصد برای آزمون طراحی شده به دست آمد.نتیجه گیری: تشخیص سریع بیماری به وسیله آزمایش های مختلف مانند تست های سرمی که دارای حساسیت، اختصاصیت و سرعت عمل بالا و هزینه کمتری هستند، توصیه می شود. همچنین با توجه به درجه خلوص بالای به دست آمده در این مطالعه، می توان از این آنتی سرم در تست های مختلف، از قبیل آگلوتیناسیون و الایزا استفاده کرد.

design and development of elisa technique for detection of igg against neisseria meningitidis using purification of antisera

background and aim: neisseria meningitidis is a leading cause of death in children in developed countries. meningococcus has 13 serogroups based on the capsule antigens. rapid diagnosis of the bacteria results in timely selection of the right antimicrobial treatment. the present study, conducted in 2019, aimed to produce a highly pure antiserum for diagnostic assays for the detection of meningococcus serogroups.methods: the type of research study was research and development. inactivated bacterial suspension was intravenously injected into white new zealand rabbits. serum was collected after the last injection. purification process was performed using precipitation, chromatography, and tangential flow filtration. the produced antiserum was used in agglutination and elisa assays. the purified antiserum had a purity of more than 98% at a suitable quantity. agglutination test with the primary antigen showed 4+ result. to develop the elisa assay, the optimized concentration of primary and biotinylated antibodies was 1 and 80 micrograms, respectively. the results of positive predictive value were 100% and negative predictive value was 96%, for the designed assay.results: the purified antiserum had a purity of more than 98% at a suitable quantity. agglutination test with the primary antigen showed 4+ result. to developed the elisa assay, the optimized concentration of primary and biotinylated antibodies was 1 and 80 micrograms, respectively. the results of positive predictive value were 100% and negative predictive value was 96%, for the designed assay.conclusion: serumbased assays are recommended for the timely diagnosis of the disease since these assays are specific, sensitive, inexpensive, and rapid. the antiserum produced in the present research is highly pure. therefore, we recommend the antiserum for the development of agglutination and elisa assays for the detection of n. meningitides.