اثر بستر سه‌ بعدی حاصل از بافت سلول‌زدایی‌شده بیضه رت بر روی تمایز سلول‌های اسپرماتوگونی موش

سابقه و هدف: در جنس مذکر، سلول های بنیادی اسپرماتوگونی (spermatogonial stem cellssscs) عامل تولید سلول های جنسی و باروری هستند و کاهش و آسیب به آن ها از عوامل ناباروری است. کشت، تکثیر و تمایز sscs در محیط آزمایشگاهی می تواند راهکاری برای درمان برخی از موارد ناباروی باشد. ما در این مطالعه که در سال 1399 در مرکز ملی ذخایر ژنتیکی و زیستی ایران انجام دادیم، رشد و تمایز sscs روی بافت بیضه سلول زدایی شده (decellularized testicular matrixdtm) موش صحرایی را بررسی کردیم. روش کار: در این مطالعه تجربی، پس از استخراج sscs با روش آنزیمی از بافت بیضه موش تازه متولدشده این سلول ها به مدت سه هفته در محیط کشت اختصاصی تکثیر شدند. سلول ها پس از تایید هویت، برای تمایز در دو گروه یکی بر روی یک لایه ازdtm و دیگری در ظروف کشت معمول کشت داده شدند. پس از گذشت چهار هفته کشت تمایزی بیان ژن های پیش از میوز (شامل: plzf و oct4) و ژن های میوزی (شامل: scp3 و protamine2) در هر دو گروه با روش realtime pcr سنجیده شد. برای اطمینان از نتایج حاصل تمام مراحل کار با سه بار تکرار زیستی انجام شد و نتایج حاصل با روش آنالیز واریانس یک طرفه (one way anova) ارزیابی شد.یافته ها: بررسی میزان بیان ژن ها ی پیش میوزی و میوزی پس از چهار هفته کشت تمایزی sscs روی بستر دو بعدی و dtm با استفاده از realtime pcr نشان داد که میزان بیان ژن های میوزی روی بستر dtm به میزان معنا داری افزایش یافته است (p≤0.001).نتیجه گیری: در شرایط کشت سه بعدی حاصل از dtm به دلیل ارتباط بهتر سلول ها و وجود ماتریکس خارج سلولی طبیعی، شرایط مناسب تری برای حفظ، تکثیر و تمایز sscs نسبت به کشت دو بعدی ایجاد شده است.

effect of 3d substrate obtained from decellularized tissue of rat testis on the differentiation of mouse spermatogonial cells

background and aim: in males, spermatogonial stem cells (sscs) are the cause of germ cell production and therefore fertility. reducing and damaging sscs is one of the causes of infertility. culture, proliferation, and differentiation of sscs in vitro can be a solution to treat some cases of infertility. in the present study, performed in 2019 at the iranian biological resource center, we examined the growth and differentiation of sscs on decellularized testicular matrix (dtm) in rats.methods: in the current experimental study, after extraction of sscs by enzymatic method from testicular tissue of newborn mice, these cells were propagated in a specific culture medium for three weeks. after confirming the identity of the colonies resulting from the growth of these cells, they were cultured in two groups, one on a layer of dtm and the other in twodimensional conditions of conventional culture dishes with differential culture medium. in the fourth week, since the initiation of the differentiation culture, the expression of pre meiotic (oct4 & plzf) and meiotic (scp3 & protamine2) genes were measured in both groups. to ensure the results, all steps were performed with three biological replications and the results were evaluated using one way anova.results: : examination of premeiotic and meiotic gene expression after 4 weeks of differential culture of sscs on twodimensional substrate and dtm using realtime pcr showed that the expression of meiotic genes was significantly higher on dtm substrate (p ≤ 0.01). ).conclusion: in dtm threedimensional culture, due to the better communication of cells with each other and the presence of a natural extracellular matrix, more ideal conditions are created for the preservation, proliferation and differentiation of sscs than in twodimensional culture.