بررسی تاثیر غلظ تهای مختلف ملاتونین بر القای کلونی زایی سلول های اسپرماتوگونی ( in vitro ) در شرایط آزمایشگاه

سابقه و هدف: سلول های بنیادی اسپرماتوگونی ( sscs )مدلی عالی برای کمک به درک بیشتر روند تمایز، رشد و عملکرد بیضه هاست و در نتیجه امکان استفاده بیشتر از این سلول ها در درمان نازایی، تولید حیوان های تراریخته و داروهای نوترکیب را فراهم می کنند. هدف از این مطالعه تعیین اثر غلظت های مختلف ملاتونین بر القای کلون یزایی sscs است. مطالعه حاضر در بازه زمانی تابستان 1396 و در آزمایشگاه کشت سلولی دانشکده دامپزشکی دانشگاه رازی کرمانشاه انجام شد.مواد و روش ها: نوع مطالعه حاضر تجربی بود. در مجموع پنج بار نمونه گیری از کشتارگاه و تکرار آزمایش انجام شد. سلول های اسپرماتوگونی از بیضه بره های نابالغ با استفاده از هضم آنزیمی دو مرحله ای استخراج شد و سپس به مدت 10 روز در سه گروه شامل گروه شاهد )کشت ساده در محیط پایه dmem حاوی 1درصد آنتی بیوتیک و 5درصد سرم گوساله جنینی) fbs ( ( و تیمارهای 1 و 2 ) به ترتیب کشت در محیط کشت پایه مذکور توام با اضافه کردن یک میکرومول و یک نانومول ملاتونین( کشت شدند. تعویض محیط کشت هر 72 ساعت یک بار انجام و همزمان تعداد و قطر کلونی ها با استفاده از میکروسکوپ معکوس ارزیابی شد. آزمون آماری مورد استفاده آنالیز واریانس یکطرفه و سطح معنا داری 05 / p >0 در نظر گرفته شد.یافته ها: ماهیت بنیادینگی سلول های اسپرماتوگونی با استفاده از رنگ آمیزی ایمنوسیتوشیمی علیه آنت یژن pgp9.5 تایید شد. تعداد و مساحت کلونی های اسپرماتوگونی در روز هفتم کشت در تیمار یک به طور معنا داری بیشتر از گروه شاهد بود (p=0/04578)نتیجه گیری: به نظر می رسد افزودن ملاتونین با دوز یک میکرومول تاثیر مثبتی بر القای کلونی زایی سلول های بنیادی اسپرماتوگونی در محیط آزمایشگاه دارد. نویسندگان استفاده از هورمون ملاتونین را با دوز فوق برای کشت اسپرماتوگونی گوسفند پیشنهاد میکنند.

Effect of melatonin on SSCs colony formation in vitro

Background: Spermatogonial Stem Cells (SSCs) are used as an excellent model system for differentiation, development, and functioning of testes and provide a source of cells for infertility treatment and production of transgenic animals and recombinant drugs. The aim of the present study was to determine the effects of different concentrations of melatonin on prepubertal lamb’s spermatogonial colony formation. Methods: An experimental study was conducted. Each treatment was replicated 5 times. Testicular cells were isolated from testes of prepubertal lambs using twostep enzymatic digestion and then cultured for 10 days. Control cells (C) were grown in basic DMEM media with %1 antibiotic and %5 FBS. Treated cells were grown in basic media with 1 μmol/ml (T1) or 1 nmol/ml (T2) melatonin. Culture media was changed every 72h and SSCs colony formation was monitored via inverted microscope. Data were analyzed running one way ANOVA.P values less than %5 were considered as statistically significant.Results: SSCs were identified via immunocytochemistry assay against PGP9.5. Number and surface area of colonies were greater in T1 group than C and T2 groups on day 7 (P=0.04587).Conclusion: The findings suggest that simultaneous addition of 1 μmol/ml melatonin to culture media may increase in vitro colony formation of prepubertal sheep SSCs. So, addition of above dose of melatonin to SSCsculture media is suggested.