بررسی اثر تزریق داخل صفاقی نانوذره کیتوزان همراه شده با آنتی‌ژن های ترشحی-تراوشی لیشمانیا ماژور برعملکرد ماکروفاژها در مواجهه با انگل در موشهای balb/c

سابقه وهدف: لیشمانیا ماژور عامل بیماری لیشمانیوز است. این بیماری در حال حاضر به یک مشکل بهداشت عمومی تبدیل شده است. تعدیل پاسخ هایسیستم ایمنی به نحوی که بتواند عفونت یا تکثیر انگل را مهار کند، یک راه موثر در غلبه بر لیشمانیوز خواهد بود. آنتی ژن های ترشحی تراوشی انگل لیشمانیا، نقشتعدیل کنندگی سیستم ایمنی را بر عهده دارند، از این رو در طراحی واکسن و روش های ایمونوتراپی به کار گرفته می شوند. به نانوذرات با توجه به ویژگی هایی کهدر تحریک سیستم ایمنی دارند، در سال های اخیرمورد توجه قرار گرفته اند. هدف از این تحقیق، تولید ترکیبی از نانوذرات و آنت یژن های ترشحیتراوشی است کهبتواند پاسخ ایمنی را القا کند.مواد و روش ها: در این مطالعه تجربی که روی ماکروفاژهای صفاقی موش انجام شده است، آنتی ژن های ترشحی تراوشی انگل لیشمانیا ماژور از سوپرناتانتکشت انگل با استفاده از اولتراسانتریفیوژ جدا شده و محدوده وزن مولکولی پروتئینی و مقدار آن به روش sds-page و برادفورد تعیین شد. سپس این آنتی ژن هابا نانوذره کیتوزان همراه شدند و صحت آن با ftir تایید شد. برای بررسی خاصیت کشندگی نانوذره بر ماکروفاژها، تست mtt انجام شد. پنج گروه موش مادهbalb/c در روزهای 10،21 ، 0 به صورت داخل صفاقی با نانوذره و نانوذره همراه با پروتئین حساس شدند. ماکروفاژها در روز 28 از موش ها جدا شده و به مدت یکساعت با انگل مجاور شدند. بعد از 72 ساعت انکوباسیون، میزان تولید no و مهار رشد انگل در پاسخ به لیشمانیا بررسی و با تست آماری onewayanovaآنالیز شد.نتایج: در بررسی انجام شده، آنتی ژن های ترشحی تراوشی انگل لیشمانیا ماژور در محدوده وزنی 75 110 کیلو دالتون قرار داشتند و با راندمان 76 درصد با نانوذراتکیتوزان همراه شدند. نتایج به دست آمده نشان داد که آنتی ژن های ترشحی تراوشی انگل لیشمانیا ماژور به تنهایی سبب افزایش معنا دار تولید نیتریک اکساید درماکروفاژها می شود و حضور کیتوزان این افزایش را تقویت می کند( p<0.01 ). همچنین گروهی که آنت یژن های ترشحی تراوشی انگل لیشمانیا ماژور همراه شده باکیتوزان را دریافت کرد هاند، ک مترین میزان تکثیر انگل را نشان دادند( .(p<0.05نتیج هگیری: آنتی ژن های ترشحیتراوشی لیشمانیا ماژور اگر با نانوذره کیتوزان همراه شوند، می توانند از راه افزایش تولید نیتریک اکساید، عملکرد کشندگیماکروفاژ را افزایش دهند. از این رو می توانند به عنوان کاندیدایی برای تولید واکسن و بهبود بیماری مطرح شوند.

Effect of Intra-Peritoneal Injection of Chitosan Nanoparticle Loaded with Leishmania major Excretory-Secretory Antigens on Macrophage Function in Exposure to Parasites in BALB/c Mice.

Background: Leishmania major (L.major) is a causative agent of leishmaniasis. The disease has now becomea public health problem. Modulation of the immune responses to inhibit the infection or the proliferationof the parasite is an effective way to overcome the leishmaniosis. Leishmania parasite secretoryexcretoryantigens are responsible for immune system modulation; therefore, they are used in vaccine design andimmunotherapy. Nanoparticles have been considered in recent years due to the features that stimulatethe immune system. The purpose of the present study was to produce a combination of nanoparticles andsecretoryexcretory antigens to induce immune responses.Materials and methods: L.major secretoryexcretory antigens were isolated from supernatant of parasiteculture using ultracentrifugation and protein molecular weight and concentration were determined usingSDSPAGE and Bradford methods. The chitosan nanoparticle were loaded with antigens which confirmedby FTIR. MTT test was performed to determine the cytotoxic effect of nanoparticles on macrophages. Fivegroups of female BALB/c mice were sensitized with nanoparticles and nanoparticles loaded with the proteinon days 0.10 and 21. The macrophages were isolated from the mice and infected with L.major for one hour.After 72 hours of incubation, NO production and inhibition of parasite growth were measured in responseto L.major.Result: In the present study, the excretorysecretory antigens of the L.major were in the range of 75110kDa, and loaded with chitosan nanoparticle by %76 efficacy. The results showed that the excretorysecretoryantigens of the L.major parasites significantly increased the production of nitric oxide in the macrophagesand the presence of chitosan induced this increase (P<0.01). In addition, the group that received chitosanloaded with the excretory secretory antigens of the L.major showed the least proliferation of the parasites(P<0.05).Conclusion: If chitosan nanoparticles loaded with L.major excretorysecretory antigens can increasethe activity of macrophage killing function by increasing nitric oxide production; therefore, they can benominated as candidates for vaccine development and disease improvement.