طراحی و راه اندازی روش taqman real-time pcr جهت تشخیص و تعیین کمی ویروس نقص ایمنی اکتسابی نوع1 (hiv-1)

سابقه وهدف: ویروس نقص ایمنی انسانی نوع 1 ( hiv1 ) یکی از مهمترین عوامل عفونی منتقل شده از طریق خون است که یک معضل جهانی محسوبمی شود، بنابراین تشخیص صحیح، دقیق و حساس این ویروس از اهمیت بسیاری برخوردار است. هدف از این مطالعه، طراحی یک روش حساس بر پایه real-time pcr taqman برای تشخیص hiv1 می باشد.مواد و رو شها: آغازگرها و پروب توسط نرم افزارهای بیوانفورماتیکی برای یک ناحیه 199 جفت بازی برای ژن int hiv-1 طراحی شد. استانداردهای مورد استفاده برای تعیین حساسیت آنالیتیکی با استفاده از rna های حاصل از رونویسی در آزمایشگاه تهیه شد. همچنین برای بررسی اختصاصی آنالیتیکی از پایگاه blast و اختصاصیت کلینیکی با استفاده از پانل های ویروسی مختلف و نمونه ژنوم حاصل از افراد سالم استفاده شد.یافته ها: این روش قادر به اندازه گیری حداقل 10 کپی از hiv1 rna در هر میلی لیتر است. علاوه بر این، آزمایش در محدوده 10-9^10 کپی در میلی لیتر خطی است. با بررسی نمونه های منفی، ویژگی این روش 100 درصد می باشد. نتایج تکرارپذیری واکنش در سطح درون سنجی و بین سنجی بررسی شد برای این منظور 9 تکرار از هر غلظت از نمونه کنترل در هر واکنش کاری مورد بررسی قرار گرفت.نتیجه گیری: با توجه به سطح حساسیت و ویژگی مناسب، آنالیز سریع، کاربرد آسان و هزینه نسبتاً کم در مقابل کیت های مشابه، این روش می تواند برایتشخیص موثر ویروس hiv-1 مناسب باشد. همچنین می توان آلودگی به ویروس را قبل از تغییرات سرمی و ظهور آنتی بادی ها در خون تشخیص داد و دوره پنجره عفونت را کوتاه تر کرد.