بررسی اثر لوراتادین بر ترشح شبه کیتیناز ykl-40 در سلول های اپیتلیال آلوئولار ریه (a549) و سلول های مونوسیتی (thp-1) تحریک شده با عصاره مایت

سابقه و هدف: شبه کیتیناز ykl-40 تحت تاثیر عوامل آلرژیک از سلول های اپیتلیال و ماکروفاژ ترشح می شود و در آسیب زایی آلرژی ها نقش ایفا می کند. برخی از آنتی هیستامین ها از جمله لوراتادین ممکن است دارای اثرات ضد التهابی نیز باشند. البته در مورد اثرات ضد التهابی لوراتادین توافق نظر وجود ندارد. به منظور ارزیابی اثر ضد التهابی لوراتادین تاثیر آن بر ترشح شبه کیتیناز ykl-40 در دو رده سلولی a549 و thp1 تحریک شده با آلرژن مورد بررسی قرار گرفت.مواد و روش ها: این مطالعه از نوع تجربی می باشد. پس از مطالعات تعیین دوز با استفاده از روش سایتوتوکسیسیته نوترال رد سلول های اپیتلیال آلوئولار تیپ ii (a549) و سلول های مونوسیتی (thp1) به تعداد cell/well 104 x 2 در دو حالت قبل و بعد از مواجهه با عصاره مایت (u/ml 500) تحت تیمار با لوراتادین ( μg/ml 0.5) قرار گرفتند. در نهایت در مایع رویی کشت سلولی میزان شبه کیتیناز ykl-40 به روش الایزا مورد سنجش قرار گرفت . داده های حاصل با استفاده از نرم افزار آماری spss 16 مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفتند. یافته ها: سلول های a549 مولدykl-40 نبودند و حتی در مواجهه با عصاره مایت نیز قادر به تولید و ترشح این کیتیناز نبودند. سلول های thp1 قادر به ترشح ykl-40 بودند. پیش تیمار (pretreatment) با لوراتادین تولید و ترشح ykl-40 از سلول های thp1 تحریک شده با آلرژن را در مقایسه با گروه کنترل کاهش داد. میزان ykl-40 در سلول های دریافت کننده لوراتادین 4470 پیکوگرم بر میلی لیتر بوده درحالی که در گروه کنترل 8700 پیکوگرم بر میلی لیتر برآورد گردید (p≤0.05). البته در سلول هایی که ابتدا با آلرژن تحریک شدند و سپس لوراتادین دریافت کردند، کاهش میزان ykl-40 دیده نشد. نتایج آزمایش نوترال رد هم نشان داد که تیمارها و سایر عوامل اثر توکسیک بر سلول ها نداشته اند.نتیجه گیری: سلول های a549 که در مطالعات برون تنی مدل های واکنش آلرژیک به طور گسترده مورد استفاده قرار می گیرند قادر به تولید ykl-40 به عنوان یک واسطه مهم واکنش های آلرژیک نمی باشند و استفاده از این رده سلولی به تنهایی نمی بایست مبنای مطالعات برون تنی واکنش های آلرژیک قرار گیرد. لوراتادین با مهار ترشح شبه کیتیناز ykl-40 از سلول های میلوئیدی ممکن است دارای اثر ضد التهابی نیز باشد. با توجه به مشاهده اثر داروی لوراتادین در کاهش ykl-40 در مطالعه فعلی، انجام مطالعات تکمیلی در زمینه امکان بررسی تجویز لوراتادین در بیماری هایی که این شبه کیتیناز نقش آسیب زایی دارد٬ پیشنهاد می گردد.

To explore the effect of loratadine on YKL-40 production in Mite extract stimulated A549 and THP-1 cells

Background: The chitinaselike protein, YKL-40, plays an important role in allergic diseases pathogenesis. Allergens induce its production from macrophages and epithelial cells. Some investigations indicated that loratadine has antiinflammatory effects apart from its H1 receptors antagonist activity. We sought to know whether human epithelial cells and macrophages stimulated for YKL-40 synthesis by house dust mite (HDM) extract, might be influenced by loratadine. We used the human pulmonary type II epithelial cell line A549 and the human monocytic cell line (THP1) for our in vitro study.Method: This research is an experimental study. After dosefinding studies using neutral red cytotoxicity assay, the cells were preincubated with loratadine (0.5 mu;g/ml) and then stimulated by HDM extract (GREER Lab). Also, in posttreatment condition; A549 and THP1 cells were stimulated with HDM extract followed by incubation with loratadine. Finally, the amount of YKL-40 released into the cell supernatants was determined by a specific ELISA. Data were analyzed using SPSS software v.16. Results: A549 cells cannot produce and secret YKL-40 at baseline level or in HDM stimulated condition. In spite of A549, THP1 cells stimulated with HDM extract showed a significantly increased release of YKL-40. In comparison with control cells, Preincubation with loratadine diminished the YKL-40 release from the HDM stimulated THP1 cells in a significant manner. The YKL-40 level in loratadine group was 4470 pg/ml while it was 8700 pg/ml in the control group (P le;0.05). Although in HDM pretreated cells followed by incubation with loratadine YKL-40 decrease was not found. The Neutral Red Assay results represented nontoxicity of treatments.Conclusions: A549 cells that are used widely in invitro models of allergic reactions cannot produce YKL-40 as a mediator of allergic reactions. Therefore, this cell line should not use alone in these studies. Loratadine may have antiinflammatory effects by suppressing YKL-40 secretion from myeloid cells. As regard to the ability of loratadine to attenuate YKL-40, therefore, we suggest that further studies are warranted to examine its therapeutic potential in diseases that YKL-40 plays a critical role in the pathogenesis.