مقایسه حساسیت دو روش rtpcr و rrtpcr برای تشخیص ویروس بیماری نیوکاسل در طیور

زمینه مطالعه: بیماری نیوکاسل یکی از مخرب ترین بیماریهای ویروسی طیور در سرتاسر جهان است. هدف: با توجه به اینکه روش‌های سنتی قابلیت محدودی در کنترل این بیماری دارند، انجام این مطالعه به منظور استفاده از تکنولوژی‌های نوین برای تشخیص به موقع بیماری جهت کاهش خسارت پیش روی صنعت طیور می‌باشد. روش کار: استخراج rna با استفاده از کیت rnease mini و بر اساس دستورالعمل شرکت سازنده انجام شد. rna استخراج شده با 109×23/68 رونوشت اولیه به صورت سری رقت‌های µl‌100، برای انجام واکنش  rtpcrو rrtpcr تهیه شد. واکنش rtpcr با استفاده از کیت rnease mini و واکنش rrtpcr با استفاده از کیت تجاری (شرکت genekam biotechnology ،آلمان) انجام شد. نتایج: برای روش rrtpcr تا سری رقت تهیه شده 3410 تکثیر صورت گرفت و برای روش rtpcr تا سری رقت تهیه شده -20 10 بر روی ژل آگارز 1/5٪ باند مشاهده شد. براساس نتایج مشاهده شده روش rrtpcr قادر به تشخیص 3410×1رونوشت و روش rtpcr قادر به تشخیص 2010×1 رونوشت از نمونه اولیه است. نتیجه‌گیری‌نهایی: حساسیت روش rrtpcr تقریباً دو برابر روش rtpcr است و در مقایسه با روش rtpcr، قادر به تشخیص ویروس بیماریزای نیوکاسل در نمونه‌های آلوده‌ای با 10000 برابر رونوشت کمتر از rna ویروسی می‌باشد.

A comparison of sensitivity analysis of RRTPCR and RTPCR techniques for diagnosis of avian Newcastle disease virus

BACKGROUND: Newcastle disease is one of the most serious viral diseases in the poultry worldwide. OBJECTIVES: Since the traditional strategies have been hardly effective in controlling the disease, the purpose of this study was to introduce new methods for early and rapid diagnosis of Newcastle. The present study helps to reduce further damage to the poultry industry. METHODS: RNA extraction was performed, using RNease mini kit, according to the manufacturer’s instructions. Extracted RNA with 68.23×109 copy numbers was prepared as serial dilutions of 100 μL for RTPCR and RRTPCR reactions. RRTPCR and RTPCR were performed, using commercial kit and RNease mini kit, respectively.  RESULTS: Results showed that amplification was done according to prepared dilution equal 1034 for RRTPCR reaction and a visible band observed on 1.5% Agarose gel up to 1020 for RTPCR reaction. Based on the results observed, RRTPCR and RTPCR reactions are able to detect 1034 and 1020 copy numbers of primary sample, respectively. CONCLUSIONS: The sensitivity of RRTPCR reaction is almost twice compared with RTPCR reaction, also RRTPCR reaction is able to diagnose Newcastle disease virus in infected samples with 10,000 copy numbers of the RNA virus less than RTPCR.