طراحی و تولید رده»‌ سلولی بیان کننده ِ ژن‌های‌UTR’ 5 و ‌3NS از عامل اسهال ویروسی گاوها ‌(BVDV)‌ به منظور ارزیابی کارآیی روش‌های درمانی علیه این ویروس

زمینه مطالعه:‌ ‌عامل مولد اسهال ویروسی گاو ‌(bvdv)‌ عامل مضرات اقتصادی، بهداشتی قابل توجهی در مزارع پرورش گاو است. به دلیل ناکارآمدی نسبی برنامه‌های ریشه کنی این ویروس، در سال‌های اخیر برای مبارزه با آن تدابیر متعدد ضد ویروسی نظیر ژن درمانی به فراوانی به کار گرفته شده است. یکی از روش‌های ارزیابی کیفیت این تدابیر، استفاده از این ابزارهای ضد ویروسی در رده‌های سلولی اختصاصی بیان کننده آن ژن از طریق القای بیان ژن توسط پلاسمید حامل یا عفونت با وکتورهای ویروسی است. هدف:‌ ‌این مطالعه با هدف تهیه یک رده ی سلولی بسیار بیان کننده بخشی از ژنوم bvdv برای ارزیابی کارآمدی روش‌های درمانی و پیشگیرانه علیه این ویروس انجام شد. روش کار:‌ ‌بدین منظور پس از کشت سویه استاندارد nadl از bvdv و استخراج vrna، افزوده سازی ژن‌های کد کننده 'utr5 و ‌3ns از ژنوم این ویروس و سپس کلونینگ این قـطعـات ژنـی در پلاسمیـد لنتـی ویروسی ‌ pwpi- linker b در فرادست ژن gfp انجام شد. پس از تایید کلونینگ، لنتی وکتور‌های حاوی 3bvdv- ns و ‌'utr5 bvdv-‌ در سلول‌های t293 با استفاده از سیستم packaging نسل سوم تولید شدند. در مرحله بعد سلول‌های mdbk بیان کننده دایمی ‌'utr5 و ‌3ns با استفاده از عفونت با لنتی ویروس‌های بیان کننده 3bvdv- ns و ‌'utr5 bvdv-‌ تولید گردیدند. نتایج:‌ ‌کارآمدی عفونت با لنتی وکتورهای حامل ترانس ژن با آزمون‌های مشاهده مستقیم با میکروسکوپ فلورسنت، وسترن بلاتینگ و rt-pcr بررسی و با گروه کنترل مقایسه گردید و حضور و بیان ژن‌های مورد نظر تایید شد. نتیجه‌گیری‌نهایی:‌ نتایج نشان دهنده تولید موفقیت آمیز رده ی سلولی mdbk بسیار بیان کننده این دو ژن از bvdv بود و لنتی وکتورها به دلیل بیان طولانی مدت و پایدار ژن تا چندین نسل سلولی و امکان عفونی نمودن بسیاری از رده‌های سلولی نسبت به سایر وکتورهای ویروسی ارجحیت دارند.