جداسازی اسپرم‌های منجمد حامل کروموزوم x و ‌ y گاومیش با روش شیب غلظت وارزیابی آن با روش هیبرید کردن در جا با ماده فلورسنت

زمینه مطالعه: تعیین جنسیت اسپرم یکی از راه‌های مهم پیش انتخاب جنسی نتاج است که به همراه تلقیح مصنوعی، توانایی قابل توجهی برای بهبود رونـد اصلاح نـژاد دام‌هـا دارد. هدف‌: ‌هدف از انجام این تحقیق ارزیابی شیب غلظت ناپیوسته allgrad درجداسازی اسپرمهای گاومیش بر اساس کروموزومهای جنسی به روش هیبرید کردن فلورسنت درجا‌ (fish)‌ بود. روش کار: جهت جداسازی اسپرم‌های حاوی کروموزوم‌های جنسی ‌ و ‌ منی منجمد گاومیش پس از ذوب به روش شیب غلظت ستونی از غلظت نامتناوب 4 لایه‌ای از غلظت 65 تا 95 و با اختلاف 10درصد بین لایه‌های متوالی با استفاده از محیط ‌ تهیه گردید. نمونه اسپرم پس از ذوب برروی اولین لایه تیوب قرار گردید تا اسپرماتوزوییدهای با چگالی مشابه را پس از سانتریفیوژ در یک سـطـح جمـع آوری واستخـراج نمـایـد. از روش ‌بـا پـروب رنگـی تهیـه شده گاوی برای تمایز اسپرم‌ها در محیط‌های تفکیکی استفاده گردید. شمارش اسپرماتوزوییدها برحسب وجود سیگنال‌های رنگی قرمز و سبز که به ترتیب معرف اسپرم‌های حامل کروموزوم‌های ‌ و ‌ بود صورت گرفت. نتایج: بر اساس نتایج بدست آمده اختلاف معنی‌داری در تعداد اسپرم‌های با کروموزوم‌های‌‌x درمحیط مایع جداشده از لایه تحتانی نسب به فوقانی (3/78 در مقـابـل 7/21 درصـد)گـزارش گـردیـد(05/0 p < ‌‌.) ازسـوی دیگر در تمامی نمونه‌های تحت آزمایش تعداد اسپرماتوزوییدهای باکروموزوم‌های ‌ در مایع جداشده از لایه فوقانی (5/75 در مقابل 5/24 درصد) بیشتر بود ‌(05/0 p < ‌‌.) نتیجه گیری نهایی: به طور کلی نتایج تحقیق حاضرنشان داد استفاده از ستون نامتناوب چهار لایه‌ای محیط allgrad یک روش مطمین برای جداسازی اسپرماتوزوییدها منی منجمد پس از ذوب گاومیش می‌باشد.