ارزیابی کارایی آنتی سرم پلی‌کلونال علیه موتیف حفظ شده هماگلوتینین ویروس آنفلوانزا در تشخیص ویروس‌های هومولوگ و هترولوگ

زمینه مطالعه: بیماری آنفلوانزای پرندگان تحت تیپ h9n2 از مهم‌ترین بیماری‌های ویروسی ماکیان در کشورهای آسیایی به شمار می‌رود. جهش‌های متعددی که در گلیکوپروتئین سطحی هماگلوتینین ha به عنوان آنتی‌ژن اصلی ویروس رخ می‌دهند، تفسیر نتایج آزمایش‌های سرولوژی برپایه ha را با مشکل مواجه می‌کنند.هدف: در مطالعه تجربی حاضر، توانایی آنتی‌بادی پلی‌کلونال علیه موتیف حفاظت شده پروتئین ha در شناسایی جدایه‌های هترولوگ h9n2 مورد بررسی قرار گرفت.روش‎کار: بر اساس داده‌های بیوانفورماتیک، موتیف حفاظت شده پروتئین ha انتخاب و در ناقل (+)pet-28a بیان شد. برای تولید آنتی سرم پلی‌کلونال، پپتید نوترکیب با ادجوان روغنی مخلوط و به جوجه‌های spf تزریق شد. به طور مشابه آنتی سرم حاصل از ویروس غیرفعال تهیه شد. کارایی آنتی سرم‌ها در آزمایش ممانعت از هماگلوتیناسیون hi متقاطع با ویروس‌های h9n2 هومولوگ و هترولوگ مورد ارزیابی قرار گرفت.نتایج: در واکنش با آنتی سرم پلی‌کلونال، میانگین عیار آنتی‌بادی hi علیه ویروس‌های هومولوگ و هترولوگ یکسان و برابر 5 برآورد شد. این عیار با آنتی سرم ویروس غیرفعال برای ویروس هومولوگ 7 و برای ویروس‌های هترولوگ بسیار کمتر برآورد شد. این اختلاف از نظر آماری معنی‌دار بود.نتیجه­گیری نهایی: با ارزیابی‌های انجام شده این آنتی سرم دارای کارایی مناسب در شناسایی جدایه‌های متفاوت ویروس h9n2 می‌باشد و در مقایسه با آنتی سرم معمول با دقت بیشتری آنتی‌ژن‌های مختلف یک تحت تیپ را تشخیص می‌دهد. آنتی سرم پلی‌کلونال حاصل فاقد بازدارنده‏های غیراختصاصی می‌باشد که ممکن است تفسیر یافته‏های سرولوژی را با مشکلاتی مواجه نماید؛ این نتایج نشان داد آنتی سرم پلی‌کلونال توان شناسایی ویروس‌های h9n2 جدا شده در سال‌های مختلف با آزمایش hi را دارد، هرچند معتبرسازی آن مستلزم انجام آزمایش با تعداد بیشتر ویروس است.

evaluation of the efficiency of polyclonal antiserum against the conserved motif of influenza virus hemagglutinin in the detection of homologous and heterologous viruses

background: the h9n2 avian influenza is one of the most important viral diseases of poultry in asian countries. continuous mutations in the hemagglutinin (ha) protein as the main viral antigen make interpreting the ha-based serology test results difficult.objectives: in this experimental study, the ability of polyclonal antibodies against the conserved motif of ha protein in detecting heterologous h9n2 isolates was evaluated.methods: based on the bioinformatics data, a conserved motif of ha protein was selected and expressed in the pet-28a(+) vector. the recombinant peptide was mixed with an oil adjuvant and injected into specified pathogen free (spf) chickens to produce the polyclonal antiserum. similarly, antiserum from the inactivated virus was prepared. the efficiency of the prepared antisera was evaluated in the cross hemagglutination inhibition (hi) test using the homologous and heterologous h9n2 viruses.results: the average titer of hi antibody against homologous and heterologous viruses using the polyclonal antiserum was equal to five. this titer was estimated to be seven for the homologous virus and much lower for heterologous viruses with inactivated virus antiserum. the difference was statistically significant.conclusions: according to the evaluations, this antiserum has a suitable efficiency in identifying different isolates of the h9n2 virus, and compared to the usual antiserum, it detects different antigens of a subtype more accurately. the resulting polyclonal antiserum does not contain non-specific inhibitors, which may cause problems interpreting serological findings. the results showed that polyclonal antiserum could identify h9n2 viruses isolated in different years by hi test; however, its validation requires testing with more viruses.