تخلیص و تغلیظ ویروس هاری با استفاده از فیلتراسیون جریان مماسی (Tff) جهت تولید واکسن هاری دامی

زمینۀ مطالعه: جهت ساخت واکسن هاری دامی از سلول bhk21 و ویروس سویه پاستور استفاده می‌شود. اگرچه پروتکل‌های مختلفی برای خالص‌سازی در پروسه تولید واکسن پیشنهاد شده ‌است لیکن این پروتکل‌ها اثرات منفی بر محصول نهایی دارند و نیازمند بهینه‌سازی می‌باشند.هدف: در مطالعه حاضر تلاش شد تا روش تغلیظ و خالص‌سازی ویروس مورد استفاده جهت ساخت واکسن هاری دامی بهینه‌سازی گردد.روش‎کار: ابتدا ویروس هاری سویه پاستور در سلول‌های bhk21 به مدت 5 روز با کمکdmem ، 7 درصد سرم جنین گاوی کشت داده‌ شد. سپس خالص‌سازی با استفاده از فیلتراسیون جریان مماسی (tff) انجام شد. کیفیت ویروس‌های خالص‌سازی شده از طریق تیتراسیون ویروسی و الکتروفورز عمودی سنجیده شد. سپس غیرفعال شدن نمونه‌ها توسط بتاپروپیولاکتون انجام و در شرایط درون تنی و برون تنی مورد بررسی قرارگرفت. در نهایت، قدرت و کارایی واکسن فرموله شده با روش nih مورد ارزیابی قرار گرفت.نتایج: مطالعه تیتراسیون ویروسی در نمونه‌های tff نشان‌دهنده افزایش تیتر ویروسی در مقایسه با گروه کنترل بود (05/0p<). تجزیه و تحلیل ژل الکتروفورز عمودی نمونه‌های خالص‌ شده و تغلیظ شده نشان دادند ویروس‌هایی که با استفاده از tff خالص‌سازی و تغلیظ شده ‌بودند در مقایسه با نمونه‌های تغلیظ نشده از خلوص بیشتری برخوردارند. علاوه بر این، در مطالعه ارزیابی قدرت و پتانسی واکسن افزایش 10 برابری قدرت و کارایی واکسن نیز مشهود بود.نتیجه گیری نهایی: مطالعه حاضر نشان داد که استفاده از روش tff برای حجم بالای مایع ویروسی جهت تغلیظ و تخلیص بسیار مناسب است و قابلیت اجرا در مقیاس صنعتی جهت افزایش میزان قدرت و کارایی واکسن تولید شده را دارد.

Clarification and Concentration of Rabies Virus using Tangential Flow Filtration (TFF) for Veterinary Rabies Vaccine Production

BACKGROUND: The veterinary Rabies vaccine was produced using BHK21 cells and PV strain. Although various protocols have been suggested for virus purification, they have an adverse effect on the final production and require further optimization.OBJECTIVES: The present study aimed to optimize the concentration and purification of the virus for rabies vaccine production.METHODS: First of all, the Pasteur virus strain (PV) was cultured by using BHK 21 cells with DMEM media contain bovine fetal serum (7 %) for five days. Subsequently, the virus purification was done via tangential flow filtration (TFF) system. The quality of purifying viruses was an assessment with titration and SDSPAGE. Secondly, the virus inactivation was optimized using Minitab software based on three factors, namely time, temperature, and concentration. Afterwards, the inactivity of the samples was tested on mice. Finally, the virus potency was evaluated by the National Institute of Health (NIH) method.RESULTS: The viral titration test in TFF samples revealed that viral titer increased in comparison with the control group (P<0.05). The SDSPAGE analysis of the purified and concentrated samples showed that the purified virus via TFF had a higher purity compared to the notconcentrated samples. Moreover, the NIH test indicated a 10fold increase in potency result in the TFF group.CONCLUSIONS: The present study implied that the TFF method is highly suitable for condensation and purification of a high volume of viral fluid and could be applied on an industrial scale to increase the potency of the vaccine produced.