بکارگیری تکنیک نوین ترکیب Pcr کمی با پروپیدیوم مونوآزید جهت شمارش استافیلوکوکوس اورئوس انتروتوکسیژنیک در محصولات خامه‌ای قنادی

زمینۀ مطالعه: استافیلوکوکوس اورئوس یکی از پاتوژن های مهم انسانی است که عامل بروز عفونت بوده و نیز با تولید انواع مختلف انتروتوکسین ها موجب مسمومیت های غذایی می گردد. استفاده از روش های معمول کشت جهت شمارش استافیلوکوکوس اورئوس دارای محدودیت هایی مانند مدت زمان طولانی برای رشد باکتری و فقدان حساسیت و دقت لازم در مورد سلول های زنده غیر قابل کشت می باشد. هدف: هدف از انجام این پژوهش جستجو و شمارش استافیلوکوکوس اورئوس تولید کننده انتروتوکسین های ae در محصولات خامه ای قنادی با استفاده از روش  pcr زمان واقعی در ترکیب با پروپیدیوم مونوآزید (pma) جهت تفکیک سلول های زنده از مرده بود. روش‌کار: تعداد 100 نمونه شیرینی خامه ای به مدت 2 ماه و به صورت تصادفی از کارگاه های قنادی شهر آمل تهیه شد. پس از تهیه رقت از نمونه، پلت های باکتریایی جداسازی و قبل از استخراجdna ، با pma تیمار شدند. pcr زمان واقعی جهت شمارش کل سلول های استافیلوکوکوس اورئوس و نیز سویه های انتروتوکسیژنیک آن با استفاده از پرایمرهای اختصاصی انجام شد. نتایج: نتایج شمارش کشت معمولی به نتایج pma-qpcr بسیار نزدیک بود (p>0/05)، لیکن داده های به دست آمده از qpcr که مجموع سلول های مرده و زنده را شمارش می نماید از نتایج دو روش دیگر تعداد بیشتری باکتری را نشان داد. حساسیت روش به کار رفته در این مطالعه جهت جستجوی تعداد اندک استافیلوکوکوس اورئوس (کمتر از 10سلول در گرم) قابل ملاحظه به نظر می رسد. نتیجه‌گیری نهایی: یافته ها نشان داد که استفاده از pcr در ترکیب با  pmaنتایج قابل اعتماد تری نسبت به روش معمولی کشت حاصل می نماید. با توجه به مدت زمان کوتاه حصول نتایج، اختصاصی بودن و حساسیت قابل ملاحظه این روش امید است در آینده نزدیک در آزمایشگاه های کنترل کیفیت مواد غذایی دستگاه های نظارتی به کار گرفته شود.

Applying Modern Technique of qPCR Coupling with Propidium Monoazide to Detect Enterotoxigenic Staphylococcus aureus in Cream Pastry Products

BACKGROUND: Staphylococcus aureus is one of the most important human pathogens that cause infection and also food intoxication by secreting various enterotoxins. Conventional culturing methods to detect S. aureus have some limitations such as being timeconsuming due to bacterial growth and low precision and sensitivity in detecting viable but noncultivable cells. OBJECTIVES: The objective of this study was to detect and quantify enterotoxigenic (AE) S. aureus in cream pastry products applying PCR coupling with propidium monoazide (PMA) to distinguish dead and live cells. METHODS: One hundred samples were randomly collected from pastry shops in Amol, in a period of 2 months. After preparing dilutions, bacterial pellets were separated and treated with PMA before DNA extraction. Real time PCR was conducted in order to quantify S.aureus cells and enterotoxigenic strains using specific primers. RESULTS: Results of conventional method were close to PMAqPCR data (P>0.05), but data from qPCR that includes live and dead cells shows more bacterial count than two other methods. Sensitivity of the method applied in the present study, detecting low number of S.aureus cells (less than 10/g) seems considerable. CONCLUSIONS: Findings showed that applying PCR coupling with PMA results in more reliable data than conventional culturing method. Regarding this approach being timeeffective, considerably sensitive and specific, it is expected that it be used in food quality control labs in monitoring systems in future.