ارزیابی روش های لاتکس آگلوتیناسیون و هماگلوتیناسیون غیرمستقیم در تشخیص دیکروسلیوزیس گوسفند

زمینه مطالعه:ترماتود دیژن دیکروسلیوم دندریتیکوم انگل کبد، مجاری صفراوی و کیسه ی صفرای پستانداران خصوصاً نشخوارکنندگان است که با استفاده از روش های ایمنی شناسی می توان به تشخیص زود هنگام آلودگی اقدام نمود.هدف: مقایسه آگلوتیناسیون لاتکس و هماگلوتیناسیون غیر مستقیم در تشخیص آنتی بادی ضد دیکروسلیوم دندریتیکوم در سرم گوسفندان آلوده بود. روش کار: پس از جداسازی انگل های زنده از کبد 50 راس گوسفند آلوده، بخشی از انگل ها به منظور تهیه ی آنتی ژن پیکری با استفاده از سونیکاتور هموژن شدند و بخشی دیگر در شرایط استریل به محیط کشت انتقال یافتند تا از مواد ترشح شده از انگل به عنوان آنتی ژن دفعی ترشحی استفاده شود. از گوسفندان آلوده و بره های غیر آلوده به دیکروسلیوم دندریتیکوم به منظور تهیه ی سرم های مثبت و منفی خونگیری به عمل آمد. جهت تست آگلوتیناسیون لاتکس روی ذرات لاتکس، آنتی ژن ها جداگانه اضافه و مخلوط شدند تا اتصال آنتی ژن به ذرات لاتکس برقرار شود. نمونه های سرم مثبت و منفی به لاتکس فوق اضافه و از نظر واکنش لاتکس آگلوتیناسیون مورد بررسی قرار گرفتند. در آزمایش هماگلوتیناسیون غیر مستقیم پس از رقت سازی سرم ها، به گلبول قرمز حساس شده، آنتی ژن اضافه و مخلوط گردید و از نظر ظهور واکنش هماگلوتیناسیون مورد بررسی قرار گرفتند.نتایج: حساسیت و ویژگی روش لاتکس آگلوتیناسیون با استفاده از آنتی ژن دفعی ترشحی به ترتیب 84% و 97.6 % و در استفاده از آنتی ژن پیکری 96 % و 97.6 % محاسبه شد. حساسیت و ویژگی روش هماگلوتیناسیون غیر مستقیم با استفاده از آنتی ژن دفعی ترشحی به ترتیب 60 % و 92.9 % و در استفاده از آنتی ژن پیکری 92 % و 66.7 % محاسبه شد.نتیجه گیری نهایی: : با توجه به بررسی حاضر روش لاتکس آگلوتیناسیون با استفاده از آنتی ژن دفعی ترشحی و سوماتیک از حساسیت و ویژگی بالایی برخوردار است و روشی سریع و بدون نیاز به ابزارخاص در تشخیص دیکروسلیوزیس می باشد.

Evaluation of latex agglutination (LAT) and indirect haemagglutination (IHA) techniques to detect sheep dicrocoeliosis

Dicrocoeliasis caused by the small liver fluke Dicrocoelium dendriticum which live in the bile ducts and gall bladder of wild and domesticated mammals, particularly ruminant. Immunodiagnostic methods are useful for early diagnosis. OBJECTIVES: The purpose of this study was evaluation of agglutination latex (LAT) and indirect haemagglutination (IHA) tests for diagnosis of Dicrocoelium dendriticum infection in sheep. Methods: Adult worms were collected from infected livers of sheep at a local abattoir. The excretorysecretory and somatic antigens were prepared through homogenization and sonication. Infected sheep with Dicrocoelium dendriticum and noninfected lambs were bleeded to providing positive and negative serum. Somatic and excretorysecretory antigens were added and blended to latex particles. All samples of positive and negative serum were added to latex and considered according to agglutination reaction. In IHA, the sensitive RBC and somatic and ES antigens were added and blended and haemagglutination was evaluated . Results: The sensitivity and specificity of LAT by excretory secretory antigen were 84% and 97/6% and by somatic antigen were 96% and 97/6%, respectively. The sensitivity and specificity of IHA by excretory secretory antigen were 60% and 92/9%, and bysomatic antigen were 92% and 66/7%, respectively. Conclusions: According to present study, the LAT test by excretory secretory antigen and somatic has high sensitivity and specificity, and it is a quick test and without need to special tools for diagnosis of dicrocoeliosis.