خالص سازی و تعیین ویژگی های بیوشیمیایی آنزیم گلوتاتیون اس- ترنسفراز از پسیل معمولی پسته agonoscena pistaciae burckhardt and lauterer (hemiptera: psyllidae)

آنزیم گلوتاتیون اس- ترنسفراز (gst) از حشرات بالغ پسیل پسته،agonoscena pistaciae burckhardt and lauterer به واسطه رسوب گذاری سولفات آمونیوم و کروماتوگرافی میل ترکیبی با بکارگیری ستون glutathione sepharose 4b جداسازی و خالص شد. آنزیم خالص شده بصورت تک باند درsds-page ظاهر شد و وزن مولکولی آنزیم 4/28 کیلو دالتون تخمین زده شد. آنزیم از پسیل پسته به صورت 27/39 برابر و با درصد بازیابی 37/12 خالص سازی شد و آنزیم خالص شده، فعالیت ویژه 08/30 u mg-1 protein نشان داد. دما و ph بهینه فعالیت آنزیم به ترتیب 30 درجه سلسیوس و 9 به دست آمد. مقادیر km و kcat برای سوبسترای gsh (glutathione) به ترتیب 44/0 mm و 9/152 s−1 محاسبه شد و برای سوبسترای cdnb (1-chloro-2,4-dinitrobenzene) 33/0 mm و 7/207 s−1 به دست آمد. فعالیت آنزیم gst به طور کامل با اضافه کردن edta، zncl2 و sdsمتوقف شد، این در حالی است که cacl2، bacl2، cocl2، hg2cl2، mgcl2، urea، mncl2 وkcl به طور جزئی فعالیت آنزیم را متوقف کرد. مطالعات بازدارندگی in vitro نشان داد که تمام آفت کش های شیمیایی (از جمله: ایمیداکلوپرید، استامی پراید، فوزالون و آمیتراز) بر فعالیت آنزیم خالص شده gst اثر بازدارندگی دارند. نتایج مطالعه ما با گسترش اطلاعات بیوشیمیایی آنزیم gst حاصل از پسیل معمولی پسته، به درک مکانیسم های مقاومت در این آفت کلیدی کمک می کند.