|
|
تولید فاژهای پلی کلونال حاوی قطعات ژنی آنتی بادی اختصاصی باکتری xanthomonas citri subsp. citri با استفاده از فنآوری نمایش فاژی
|
|
|
|
|
نویسنده
|
رئیسی حمیده ,صفرنژاد محمدرضا ,علوی مهدی ,الهی نیا علی ,فرخی ناصر
|
منبع
|
آفات و بيماريهاي گياهي - 1396 - دوره : 85 - شماره : 2 - صفحه:265 -276
|
چکیده
|
شانکر باکتریایی مرکبات از بیماریهای باغات لیمو در جنوب کشور با عامل xanthomonas citri subsp. citri میباشد. تکنیک فاژنمایی از راهکارهای تولید آنتیبادیهای اختصاصی به منظور شناسایی گیاهان آلوده و همچنین تولید گیاهان مقاوم به بیماری است. در این تحقیق قابلیت استفاده از این سیستم برای تولید فاژهای نوترکیب حاوی قطعات آنتیبادی اختصاصی برعلیه باکتری عامل بیماری شانکر مرکبات بررسی شد. برای این منظور، پروتئین تاثیرکننده (ptha) و پیلوس (hrpe) که از اجزای اساسی سیستم ترشحی نوع سه باکتری هستند و نقش ضروری در بیماریزایی پاتوژن دارند، به عنوان آنتیژن انتخاب شدند. ابتدا پروتئینهای ptha و hrpe به صورت نوترکیب در میزبان باکتریایی تولید شدند و با روش کروموتوگرافی خالص گردیدند. از کتابخانه های فاژی حاوی قطعات ژنی نواحی متغیر آنتیبادی برای جداسازی فاژهای اختصاصی استفاده شد. غنیسازی جمعیت فاژهای اختصاصی با انجام سه مرحله غربالگری بر علیه پروتئین های خالص شده ptha و hrpeانجام شد و اختصاصیت فاژهای حاصله بر علیه آنتیژن توسط آزمون الیزا بررسی شد. فاژهای نوترکیب قابلیت اتصال به پروتئینهای ptha و hrpe را داشته و قادر به ردیابی گیاهان آلوده به بیماری شانکر باکتریایی مرکبات نیز بودند. از فاژهای جداسازی شده میتوان به منظور تولید آنتیبادی اختصاصی مونوکلونال استفاده نمود.
|
کلیدواژه
|
افکتور پروتئین ptha، پروتئین hrpe، شانکر باکتریایی مرکبات، غربالگری، نمایش فاژی
|
آدرس
|
دانشگاه گیلان, دانشکده علوم کشاورزی, ﺑﺨﺶ گیاهپزشکی, ایران, سازمان تحقیقات آموزش و ترویج کشاورزی, ﻣﻮﺳﺴﻪ ﺗﺤﻘﻴﻘﺎﺕ ﮔﻴﺎﻩ ﭘﺰﺷﻜﻲ ﻛﺸﻮﺭ, ﺑﺨﺶ ﻭﻳﺮﻭﺱ ﺷﻨﺎﺳﻲ ﮔﻴﺎﻫﻲ, ایران, ﭘﮋﻭﻫﺸﮕﺎﻩ ﻣﻠﻲ ﻣﻬﻨﺪﺳﻲ ژﻧﺘﻴﻚ ﻭ ﺯﻳﺴﺖ ﻓﻦ ﺁﻭﺭﻱ, ﺑﺨﺶ ﺑﻴﻮﺗﻜﻨﻮﻟﻮژﻱ ﮔﻴﺎﻫﻲ, ایران, دانشگاه گیلان, دانشکده علوم کشاورزی, ﺑﺨﺶ گیاهپزشکی, ایران, دانشگاه شهید بهشتی, دانشکده علوم زیستی و بیوتکنولوژی, گروه بیولوژی سلولی و مولکولی, ایران
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Production of polyclonal phages harbouring antibody fragment genes against Xanthomonas citri subsp. citri using phage display technology
|
|
|
Authors
|
RAEISI H. ,SAFARNEJAD M. R. ,ALAVI S. M. ,ELAHINIA S. A. ,FARROKHI N.
|
Abstract
|
Citrus bacterial canker, caused by Xanthomonas citri subsp. citri (Xcc),is amongst the important diseases of lime orchards in southern parts of Iran. Phage display has been used to produce specific antibodies for detection of pathogeninfected plants as well as development of resistant varieties. An effector, namely pthA and a pilus protein, HrpE, the major critical components of type III secretion (T3S) system with roles in pathogenesis, were chosen as antigens. Recombinant forms of the proteins (pthA and HrpE) were expressed in a bacterial host and purified via affinity chromatography. Tomlinson phage display libraries including single chain variable fragments were used for isolation of the specific antibodies. Biopanning, 3 rounds against pthA and HrpE proteins, allowed enriching antigenspecific phages. The specificity of phages was tested using ELISA. Moreover, the phages were able to detect the plants infected with citrus bacterial canker.
|
Keywords
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|