خالص‌سازی و تعیین ویژگی‌های بیوشیمیایی فنل‌اکسیداز همولمف شب‌پره برگ‌خوار توت glyphodes pyloalis (lep.: pyralidae)

آنزیم فنل اکسیداز (ec 1.14.18.1)، یکی از آنزیم های کلیدی در رشد و ایمنی حشرات می باشد و مهار این آنزیم می تواند به عنوان روشی جدید برای کنترل آفات مورد استفاده قرار گیرد. شب پره برگ خوار توت  (glyphodes pyloalis walker)، یکی از آفات مهم درختان توت در شمال ایران است که با تغذیه از برگ توت در پرورش کرم ابریشم اختلال ایجاد میکند. در این تحقیق، آنزیم فنلاکسیداز از همولمف شب پره برگ خوار توت با استفاده از رسوب با سولفات آمونیوم، کروماتوگرافی ژل و کروماتوگرافی تبادل یونی خالص شد. وزن ملکولی دو ایزوفرم آنزیم با استفاده از sdspage به ترتیب 69/66 و 70/53 کیلودالتون به­دست آمد. اثرات بازدارنده ها نشان داد که روش مهارکنندگی 4هگزیل رسورسینول از نوع رقابتی و اما برای کوئرسین هیدرات و کوجیک اسید از نوع مختلط می باشد. هم‌چنین، بررسی ویژگی های آنزیمی نشان داد که اسیدیته مطلوب و دمای بهینه آنزیم فنل اکسیداز به ترتیب برابر با 7 و 35 درجه سلسیوس بود و آنزیم در دماهای 40، 45 و 50 درجه سلسیوس تا 30 دقیقه پایدار بود. اثر یون های فلزی روی آنزیم خالص نشان داد که یون zn2+ کاهشی معنی‌داری بر فعالیت آنزیم داشت.

Purification and biochemical characterization of phenoloxidase from hemolymph of Glyphodes pyloalis (Lep: Pyralidae)

Insect phenoloxidase (PO) (EC 1.14.18.1) is the key enzyme in development and immunity of insects. Inhibition of this enzyme could be a new target for pest control. The lesser mulberry snout moth, Glyphodes pyloalis Walker is an important pest of mulberry trees in north of Iran. This pest feeds on mulberry leaves and causes serious problems for the silk industries. In this study, PO from hemolymph of G. pyloalis was purified by ammonium sulfate precipitation, ion exchange chromatography and gel filtration. The apparent molecular weights of two isoforms were determined by SDSPAGE as 69.66 and 70.53 KDa. The inhibitory kinetics of PO showed that the mechanisms were competitive and mixed inhibition for 4hexylresorcinol, kojic acid and quercetin, respectively. Optimal pH and maximum temperature for PO activity purified from G. pyloalis were 7 and 35 °C, respectively. The purified PO was stable at 40, 45 and 50 ºC for 30 min. The effects of different ions on enzyme activity showed that Zn2+ had a significant inhibitory effect.