تعیین ویژگی های مولکولی و پراکنش جغرافیایی ویروس کوتولگی سبزرد نخود در ایران

ویروس کوتولگی سبزرد نخود (chickpea chlorotic dwarf virus, cpcdv) از جنس mastrevirus، تیره geminiviridae، از مهمترین عوامل ویروسی همراه با عارضه زردی نخود می‌باشد. در سال های 13951394 تعداد 248 نمونه نخود و عدس با نشانه زردی از پنج استان‌‌ لرستان، کرمانشاه، زنجان، آذربایجان شرقی و غربی انتخاب و از طریق آزمون tbia و pcr  بررسی شدند. استخراج دی ان ای از نمونه های آلوده انجام و از طریق روش دایره غلطان (rca) تغلیظ و پس از هضم آنزیمی محصول (rca) با استفاده از آنزیم برشی xho i ، قطعات با اندازه حدود 6/2 کیلو جفت باز روی ژل آگاروز مشاهده شد. با استفاده از جفت آغازگر اختصاصی و انجام pcr، قطعه 960 جفت بازی تکثیر و پس از همسانه‌سازی، تعیین ترادف گردید. نتایج آزمون tbia و pcr نشان‌دهنده پراکنش ویروس cpcdv در هر پنج استان بود. بیشترین میزان آلودگی در میزبان نخود مشاهده شد. مقایسه ترادف قطعه ژنومی جدایه های ایرانی cpcdv نشانگر بیشترین یکسانی با سویه a، d و f از کشورهای هند، پاکستان و یمن بود. آنالیز تبارزائی نشانگر هم گروهی جدایه های ایرانی با سویه‌های d (جدایه های سودان، مراکش، هند و پاکستان (گروه iii تبارزائی)، سویه f (جدایه های سودان، عمان، سوریه، یمن و پاکستان (گروه iv تبارزائی) و سویه a  (جدایه‌های تونس، مصر، سوریه و ترکیه (گروه v تبارزائی ) بود.

Molecular characterization and geographical distribution of Chickpea chlorotic dwarf virus in Iran

Chickpea chlorotic dwarf virus (CpCDV, genus Mastrevirus, family Geminiviridae) is one of the most important viral agents which associated with yellowing symptom in the chickpea fields. During the surveys, 20152016, 248 chickpea and lentil plant samples showing yellowing symptom were collected from five provinces: Lorestan, Kermanshah, Zanjan, East and West Azarbaijan, in Iran. The samples were tested to CpCDV infection, using TBIA and positive samples in TBIA were tested by PCR. Total DNA of positive samples were extracted and enriched using rollingcircle amplification (RCA). RCA products were restricted using Xho I enzyme and yielding products of ~2.56 kb. These fragments were used for polymerase chain reaction (PCR), using specific primers for RepA protein of CpCDV. PCR amplicons with an expected size of ~960 bp were amplified, cloned and sequenced.TBIA and PCR results showed the presence of CpCDV infection in all surveyed provinces with the highest infection in chickpea plants. Nucleotide sequence comparisons showed that Iranian isolates shared the highest identity to strain A, D and F from India, Pakistan, and Yemen. Phylogenetic anlyses showed that Iranian CpCDV strains were grouped with Sudan, Morrocco, India, and Pakistan (strain D, group III), Sudan, Oman, Yemen, and Pakistan (starin F, GroupIV), and Tunesia, Egypt, Syria, and Turkey (strain A, group V).