ایجاد سازواره ژنی برای دست‌کاری ژنتیکی سالمونلا انتریتیدیس در محل اختصاصی ژن sipc

مقدمه: بیماری سالمونلوز بر اثر مصرف مواد غذایی آلوده به سالمونلا در انسان و حیوانات ایجاد می شود. سالمونلا، توان ایجاد عفونت خود را به واسطه داشتن ژن های بیماری زایی متعدد کسب کرده است. ژن sipc یکی از ژن های بیماری زایی سالمونلا است که پروتئین sipc را کد می کند. هدف از این پژوهش ایجاد یک کاست ژنی به منظور دست کاری ژنتیکی سالمونلا انتریتیدیس در محل ژن sipc هست.روش بررسی: در این مطالعه تجربی، پس از استخراج dna از سالمونلا، نواحی فرادست (up) و فرودست (down) ژن sipc به روش pcr، تکثیرو محصولات pcr به روش همسانه سازی t/a در وکتور pgem درج شدند. به منظور ایجاد سازواره نهایی، هر یک از قطعات نواحی فرادست و فرودست ژن sipc به ترتیب در وکتور pet32 ساب کلون گردیدند و صحت کلونینگ با روش های pcr و هضم آنزیمی بررسی شد.نتایج: تکثیر نواحی 320 جفت بازی فرادست و 206 جفت بازی فرودست ژن sipc با روش pcr با موفقیت انجام شد. همسانه سازی t/a این قطعات، سبب تشکیل دو وکتور نوترکیب pgem-up و pgem-down شد. نتایج تایید صحت ساب کلونینگ، موید تشکیل کاست ژنی نهایی pet32-up-down است.نتیجه گیری: کاست ژنی ساخته شده در این مطالعه به عنوان یک کاست چند منظوره قادر به دست کاری اختصاصی ژن sipc سالمونلا به روش نوترکیبی همسان است. این سازواره ژنی از پتانسیل لازم برای حذف ژن sipc و یا درج هر ژن مفید و موثری به جای ژن sipc، برخوردار است.

Generation of a gene cassette for genetically engineered Salmonella Enteritidis in the specific region of the sipC gene

Introduction: Salmonellosis is an infection caused by eating contaminated food with Salmonella, and it can occur in humans and other animals. Salmonella has acquired the ability to create the infection due to the presence of several virulence genes. One of the virulence genes of salmonella is sipC gene that coding the SipC protein. The aim of this study was creating the gene cassette to genetically engineered Salmonella enteritidis in the specific region of the sipC gene.Methods: In this study, after DNA extraction from Salmonella, the upstream and downstream regions of the sipC gene was amplified based on PCR method. The PCR products were cloned with T/A cloning method and they were inserted into the pGEM vector. In order to generate the final gene cassette, each of the upstream and downstream regions of the sipC gene was subcloned into the pET32 vector, and cloning accuracy was assessed by PCR and enzyme digestion methods.Results: Amplification of the 320 bp upstream and 206 bp downstream of sipC gene was successful by PCR method. T/A cloning of these fragments were caused the formation of two pGEMup and pGEMdown recombinant vectors. Results that were confirmed the subcloning accuracy indicate the formation of the final pET32updown gene cassette.Conclusion: The generated gene cassette in this study was considered as a multipurpose cassette that is able to specific gene manipulation of Salmonella sipC gene by homologous recombination matched. This gene cassette has the necessary potential for sipC gene deletion or insertion of any useful gene instead of sipC gene.