همسانه‌سازی و بیان ژن‌های ممزوجی دومن - a1 آنتی‌ژن حفاظتی با سیلوس آنتراسیس و زیرواحد B سم شیگلا در باکتری E. coli

مقدمه: یکی از فاکتورهای بیماری‌زای اصلی در شیگلا دیسانتری تیپ 1 و e. coli o157:h7، انتروتوکسین شیگلایا (stxb) بوده که خاصیت ایمنی زایی، اجوانتی و دلیوری آن به اثبات رسیده است. سیاه‌زخم (آنتراکس) یک بیماری مشترک بین انسان و دام بوده و آنتی‌بادی دومن - a1 آنتی‌ژن حفاظت‌کننده باسیلوس آنتراسیس 62 درصد آنتی‌ژن‌های مربوط به آنتی‌ژن حفاظت‌کننده (pa) باکتری باسیلوس آنتراسیس را شناسایی می‌کند. هدف ایـن مطالعه بیان ممـزوجی دومن - a1 آنتی‌ژن حفاظتی باسیلوس آنتراسیس (pa20) با زیرواحد b سم شیگلا (stxb) در باکتری e. coli می‌باشد.روش بررسی: در این مطالعه تجربی، طراحی پرایمر برای ژن‌ pa20 به منظور جایگزینی آن در کاست ژنی ipad-stxbصورت گرفت. واکنش pcr برای تکثیر این قطعه انجام و قطعه تکثیر شده به درون pgem-teasy vector همسانه سازی شد. ژن‌ pa20 توسط آنزیم‌های محدودالاثر ndei و sali برش خورده و در نهایت ژن‌ pa20 با ژن stxb ممزوج شد. وکتور pet28a(+) حاوی کاست ژنی pa20-stxb ساخته شده به باکتری e. coli سویه bl21(de3) تراریخت‌ و بررسی بیان کاست ژنی انجام شد. نتایج: ژن‌های ممزوجی pa20-stxb در وکتور بیانی pet28a(+) توسط pcr، هضم آنزیمی و با توالی یابی تایید شد. همچنین پروتئین نوترکیب تولید شده به وسیله sds-page و لکه‌گذاری وسترن تایید گردید.نتیجه‌گیری: با توجه به شناسایی آنتی ژن (pa) به وسیله آنتی‌بادی pa20 و پایداری بالای آن در واکسن‌های ava و خاصیت القای آپاپتوز آن و خاصیت ایمنی‌زایی، اجوانتی و دلیوری پروتئین stxb و بیان زیاد gb3 در سطح سلول‌های سرطانی انسان این آنتی‌ژن به عنوان یک آنتی‌سرطان و کاندید واکسن نوترکیب علیه انواع شیگلا، اشریشیاکلی و باسیلوس آنتراسیس می‌تواند مطرح باشد.