جداسازی فولیکول‌های زنده از بافت تخمدان منجمد ‌شده انسان

مقدمه: انجماد بافت تخمدان بهترین روش حفظ باروری برای دختران نابالغ و زنان مبتلا به سرطان است. اما به دلیل احتمال برگشت سلول‌های بدخیم بعد از پیوند بافت، جداسازی فولیکول از بافت تخمدان منجمد - ذوب‌شده این افراد برای بلوغ آزمایشگاهی یا ساخت تخمدان مصنوعی مورد توجه است. هدف از این مطالعه، ارزیابی تاثیر رنگ حیاتی نوترال رد (neutral red; nr) و آنزیم کلاژناز در جداسازی موفق فولیکول‌ زنده از قطعات بافت تخمدان انسانی منجمد شده است.روش بررسی: در این مطالعه تجربی- مداخله‌ای، دو گروه اصلی وجود دارد: گروه حاوی رنگ حیاتی nr و گروه بدون nr. قطعات خردشده (0/5×0/5میلی‌متر) از بافت تخمدان منجمد شیشه‌ای -‌ ذوب‌شده 10 فرد تراجنسی، برای هضم آنزیمی به دو فالکون حاوی htcm و آنزیم کلاژنازia (mg/ml1) منتقل شد. به یکی از فالکون‌ها nr اضافه شد. سپس فولیکول‌ها با روش مکانیکی جداسازی شدند. فولیکول‌های جداسازی‌شده از نظر ریخت‌شناسی و اندازه بررسی شدند. میزان زنده‌مانی و سلامت فولیکول‌ها با رنگ فلوئورسنت calcein-am و ethidium homodimer-i ارزیابی شد. داده‌ها با روش t-test توسط نرم‌افزار graphpad prism  مورد ارزیابی قرار گرفت.نتایج: تعداد فولیکول‌های جداسازی‌شده با nr (25/02± 46/50) بیشتر از زمانی است که از nr برای جداسازی استفاده نشد (5/58± 6/6) (0/0001 > p). هم چنین با توجه به ارزیابی‌های ریخت‌شناسی، بیشتر فولیکول‌های جداسازی‌شده از قشر تخمدان افراد تراجنسی از نوع فولیکول‌های بدوی (77/4 درصد) و اولیه (21/12 درصد) بودند و تنها تعداد کمی فولیکول‌های ثانویه (1/4 درصد)‌ در بافت تخمدان این افراد وجود داشت. رنگ‌آمیزی live/dead زنده‌بودن فولیکول‌ها را بانمایش رنگ سبز تایید کرد. نتیجه‌گیری: براساس نتایج استفاده همزمان از کلاژناز ia و رنگ حیاتی neutral red نقش مهمی در سهولت جداسازی فولیکول‌ از بافت تخمدان متراکم انسان دارد. 

isolation of viable follicles from cryopreserved human ovarian tissue

introduction: ovarian tissue freezing is the most effective method to maintain fertility for immature girls and women diagnosed with cancer. nonetheless, because of the chance that malignant cells might reappearing following tissue transplantation, it is crucial to isolate the follicles from the frozen-thawed ovarian tissue of these individuals and employ them in the process of in vitro maturation process or artificial ovarian framework. this study aimed to assess the application of neutral red (nr) vital dye alongside collagenase ia for effectively isolating viable follicles from the vitrified human ovarian tissue samples.methods: two categories existed: the category with nr and the group without nr. chopped (0.5×0.5 mm) strips of vitrified-warmed ovarian tissue from 10 transsexual individuals were placed into two falcon tubes with htcm and collagenase ia (1mg/ml). neutral red (nr) was introduced to one of the falcons. follicles were then isolated mechanically. the morphology, size, and viability of the follicles were assessed. the condition of the follicles was evaluated using fluorescent staining methods involving calcein-am and ethidium homodimer-i. the t-test method was used to evaluate the data.results: the number of isolated follicles with neutral red (46.50±25/02) exceeded those without nr (6.6±5.58; p < 0/0001). additionally, according to the morphological studies, a majority of the isolated follicles from the transsexual ovarian cortex were primordial (77.4%), and primary (21.12%) follicles, with only a small number of secondary follicles (1.4%) identified in these tissues. live/dead staining verified the viability of isolated follicles by displaying a green hue.conclusion: the finding indicates that combining collagenase i with the vital dye neutral red significantly facilitates the of follicles from dense human ovarian tissue.