تقویت اثر داروی شیمی‌درمانی 5-فلورویوراسیل توسط توکسین منفذساز فراگاسئاتوکسین C در رده‌‌‌سلولی سرطان پستان Mcf-7

مقدمه: شیمی‌درمانی به‌دلیل عوارض جانبی دوز بالای استفاده در درمان بسیاری از بیماری‌ها با محدودیت‌های زیادی مواجه است. در این تحقیق با استفاده از توکسین منفذساز فراگاسئاتوکسین c (frac) که به‌ صورت نوترکیب در باکتری تولید شده است، تسهیل ورود داروی شیمی‌درمانی 5فلورویوراسیل بر رده‌سلولی سرطان پستان mcf7 مورد بررسی قرار گرفته است.روش بررسی: در این مطالعه تجربی، پس از تهیه ژن توکسین frac از منبع تجاری، ژن با استفاده از آنزیم‌های محدود کننده ncoi و xhoi، وارد وکتور بیانی pet28a شد. بیان توکسین در باکتری اشریشیا کلی به‌وسیله iptg القا شد و توکسین به‌وسیله روش کروماتوگرافی میل ترکیبی ninta تخلیص شد. پس از بررسی فعالیت همولیز توکسین به‌وسیله روش توربیدومتری، اثرات سیتوتوکسیک و تقویت اثر داروی 5فلورویوراسیل به‌وسیله سنجش تریپان‌‌بلو و تست mtt مورد ارزیابی قرار گرفت. تحلیل داده‌ها به‌وسیله تست tstudent و نرم‌افزار spss inc vession v16 در سطح معنی‌داری پنج درصد انجام شد.نتایج: توکسین frac در باکتری اشریشیا کلی به ‌صورت نوترکیب تولید شده و به‌صورت خالص با خلوص نسبی حدود 86 درصد تهیه شد. اثرات سیتوتوکسیک این توکسین بر روی رده‌سلولی mcf7 وابسته به دوز و زمان تیمار است. مقدار ic50 برای توکسین برابر 3/3 میکروگرم بر میلی‌لیتر محاسبه شد. در دوزهای غیرکشنده، این توکسین باعث تقویت اثر 4 تا 6 برابری داروی شیمی‌درمانی 5فلورویوراسیل در زمان‌های مختلف ( 24 تا 72 ساعت) می‌شود.نتیجه‌گیری: تقویت اثر داروی شیمی‌درمانی 5فلورویوراسیل با تسهیل ورود این دارو به سلول‌های سرطان پستان mcf7توسط توکسین منفذساز frac می‌تواند از عوارض شیمی‌درمانی این دارو بکاهد.

Potentiation Effect Of 5FU by Fragaceatoxin C Pore-Forming Toxin in MCF-7 Cell Line

Introduction: Chemotherapy has been restricted due to the highdose side effects. In the present study, acceleration of the chemotherapeutic drug (5FU) entrance into MCF7 cells has been explored by using a recombinant form of Fragaceatoxin C (FraC) poreforming toxin.Methods: In this experimental study, the gene for FraC toxin was order from a commercial source and was subcloned into pET28a vector using NcoI and XhoI restriction enzymes. Expression of the protein was induced by IPTG and purification was performed using NiNTA affinity chromatography. Hemolysis was tested using a turbidimetric assay. Cytotoxic and potentiation effects of the recombinant toxin on 5FU chemotherapeutic drug were analyzed using trypan blue and MTT assays. Tstudent test was used to analyze the data using the SPSS v16 software. Significance was defined as P le;0.05Results: Recombinant FraC toxin was produced in E. coli with 86% purity. Cytotoxic effects of the FraC toxin in MCF7 cells were dose and timedependent. the IC50 of FraC toxin on MCF7 cells was 3.3 mg/ml. Nontoxic concentrations of recombinant FraC toxin enhanced cytotoxic effects of 5FU by a factor of 4 to 6 in different exposure times (2472 h).Conclusion: Potentiation of the 5FU chemotherapeutic effect by acceleration of its entrance into cancer target cells using FraC poreforming toxin can reduce its side effects of the chemotherapy.