تثبیت آنزیم سلولاز قارچ آسپرژیلوس نایجر روی نانو رشته‌های آمیلوئیدی و مقایسه سینتیکی آن با آنزیم آزاد

مقدمه: بسیاری از پروتئین‌‌ها را می‌توان در آزمایشگاه به آمیلوئید تبدیل کرد. این رشته‌ها از دیدگاه‌های گوناگون از جمله به عنوان بستری برای تثبیت آنزیم مورد توجه می‌باشند. در این تحقیق آنزیم سلولاز روی نانورشته‌های آمیلوئیدی حاصل از آلبومین سرم گاوی تثبیت و خصوصیات سینتیکی آن با فرم آزاد مقایسه شد. روش ها: تولید رشته‌های آمیلوئیدی با روش‌های جذب‌سنجی کنگورد و نشر فلورسانس tht بهینه سازی شد و با میکروسکوپ الکترونی گذاره مورد تائید قرار گرفت. آنزیم سلولاز به کمک گلوتارالدئید و با تشکیل پل‌های عرضی روی نانو رشته‌های آمیلوئیدی تثبیت شد و ویژگی‌های سینتیکی آن با آنزیم آزاد مقایسه گردید. نتایج: نتایج جذب سنجی کنگورد و نشر فلورسانس tht نشان داد که حداکثر رشته‌های آمیلوئیدی در غلظت 4 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر از پروتئین، دمای 60 درجه سانتی‌گراد و ph برابر 3 تشکیل می‌شود. تصاویر میکروسکوپ الکترونی گذاره حضور رشته های آمیلوئیدی را تائید کرد. تثبیت آنزیم، میزان فعالیت، فعالیت ویژه و vm را کاهش و میزان km آنزیم را افزایش داد و دمای بهینه آنزیم از 40 به 50 درجه سانتی‌گراد افزایش یافت. بحث: رشته‌های آمیلوئیدی می‌توانند به‌عنوان یک نانوماده جدید در تثبیت آنزیم سلولاز مورد استفاده قرار گیرند. همچنین، آنزیم تثبیت شده را می‌توان به‌عنوان یک محصول کاربردی در صنایع وابسته به سلولاز معرفی نمود.

immobilization of cellulase enzyme from aspergillus niger on amyloid nanofibers and its kinetic comparison with the free enzyme

introduction: many proteins can be converted into amyloid in the laboratory. these fields are of interest from various points of view, including as a substrate for enzyme stabilization. in this research, cellulase enzyme was immobilized on amyloid nano–biofibrils obtained from bovine serum albumin and its kinetic properties were compared with the free form. methods: the production of amyloid fibers was optimized by congored absorbance and tht fluorescence assay methods and was confirmed by transmission electron microscopy. cellulase enzyme was immobilized via glutaraldehyde cross–linking bridges on amyloid nano–biofibrils. results: the results of congored absorbance and tht fluorescence emission showed that the maximum amyloid fibers at 4 mg/ml of protein concentration, 60 ºc and a ph 3. electron microscopy images confirmed the presence of amyloid fibers. immobilizing the enzyme decreased the activity, specific activity and vm and increased the km of the enzyme. the optimum temperature of the enzyme increased from 40 to 50 ºc. discussion: amyloid nano–biofibrils can be used as a new nano–biomaterial for cellulase immobilization which introduce a useful product in cellulase–related industries.