تاثیر روش نگهداری محلول نایل رد بر شدت فلوروسانس در تشخیص لیپیدهای درون سلولی

نایل رد یک رنگ فلورسنت است که برای تعیین میزان لیپید درون سلولی استفاده میشود. این روش میتواند با دقت بالا مقادیر بسیار کم لیپید درون سلولی را شناسایی کند. اما شدت فلورسانس نایل رد با زمان تغییر میکند و همین مساله استفاده از آن را برای مجموعه آنالیزهایی که در یک فاصله زمانی انجام میشوند با مشکل مواجه میکند. با توجه به اینکه استفاده از محلول نایل رد تازه برای تمام آنالیزها امکان پذیر نیست. پس بایدروشهایی برای حفظ شدت فلورسانس محلول نایل رد باید بکار گرفته شود تا بتوان از این معرف با اطمینان برای آنالیز لیپید استفاده نمود. روش ها:در این مطالعه محلول در دمای ℃ 20- نگهداری شد و سپس شدت فلورسانس محلول نایل رد با توجه به دو عامل زمان و تعداد دفعات ذوب و انجماد بررسی شده است. برای بررسی اثر زمان نگهداری، پس از 15،45،90 و 120 روز در دمای ℃ 20 - شدت فلورسانس محلول استوک قرمز نیل اندازه گیری شد. نتیجه و بحث: نتایج نشان داد که شدت فلورسانس محلول نایل رد در اثر انجماد کاهش مییابد. اما اگر محلول منجمد شده تا زمان استفاده منجمد باقی بماند و فقط در هنگام مصرف ذوب شود، میتوان آن را برای 120 روز نگهداری کرد و کاهش شدت فلورسانس کمتر از 10درصد خواهد بود. اما اگر به دفعات ذوب و منجمد شود (4 بار یا بیشتر) شدت فلورسانس تا حدود 80 درصد کاهش مییابد که دیگر برای آنالیز مناسب نیست. به دلیل همین تغییرات شدت فلورسانس، برای هر مجموعه آنالیز غلظت بهینه نایل رد برای رنگ آمیزی لیپید باید تعیین شود. در صورتی که از معرف منجمد شده (یکبار منجمد شده) استفاده شود برای محدوده غلظت لیپید (روغن زیتون) صفر تا 4 میکروگرم بر میلی لیتر غلظت 0.05میکروگرم بر میلی لیتر از نایل رد مناسب است و لیپید را بدرستی شناسایی و غلظت آن را تعیین می‌کند.

the effect of the storage method of nile red solution on the fluorescence intensity in the detection of intracellular lipids

introduction: nile red is a fluorescent dye that is used to detect and measure intracellular lipids. this methodcan detect very low amounts of intracellular lipid with high accuracy. however, the intensity of nile redfluorescence changes over time, and this makes it difficult to use for analyzes that are performed in a timeintervals. hence, it is very important to understand the changes of nile red florescent intensity at frozen stateand its effect on lipid detection results.methods: for study of the number of melting and freezing times effect, the stock solution was melted and thenfrozen for a later use. for study of the effect of storage time, fluorescence intensity of nile red stock solutionwas measured after 15, 45, 90 and 120 days at -20 ℃.result and discussions: in this study, by storing nile red at -20 °c, the fluorescence intensity decreased.however, if the solution remains frozen until use, the decrease in fluorescence intensity will be less than 10%.the results show that in this condition, storage time could be prolonged to 120 days. if the stock solution isrepeatedly melted and frozen (4 times or more), the fluorescence intensity decreases nearly 80%, which is nolonger suitable for analysis. when the frozen stock solution is used for lipid (olive oil) concentration range of 0 to 4 μg/ml, the concentration of 0.05 μg/ml of nile red was suitable and it identified the lipid and determined its concentration accurately.