کلون و بیان آنتی بادی مونوکلونال نوترکیب تک زنجیره ای scfv علیه آنتی ژن carcinoembryonic

مقدمه: فناوری آنتی بادی‌های نوترکیب، تولید و کاربرد این نوع آنتی بادی‌ها را متحول نموده و برخی محدودیت‌های فناوری هیبریدوما را مرتفع نمود. آنتی بادی‌های مونوکلونال توانایی بالایی به عنوان عوامل تشخیصی، درمانی و به ویژه هدف قراردادن سلول‌های سرطانی دارند، اما کاربرد آن‌ها به واسطه اندازه بزرگشان با محدودیت‌هایی مواجه است. ساختار نواحی آنتی بادی‌ امکان تقسیم بندی آن‌ها را به زیر واحدهای کارا فراهم می‌سازد که این بخش‌ها می‌توانند با ترکیب شدن و اتصالات مختلف، مولکول‌های جدید کارآمدی را ایجاد نمایند. مولکول‌های scfvنسبت به آنتی بادی اولیه، به دلیل کاهش اندازه مزایای بسیاری دارند که مهمترین آن‌ها، کاهش پاسخ‌های ایمنی نسبت به آنتی بادی کامل موشی به واسطه فقدان بخش‌های ثابت می‌باشد.روش ها: در این تحقیق ژن نواحی متغیر آنتی بادی مونوکلونال ضد مارکر توموری کارسینوامریونیک به صورت scfv ساخته شده و در ناقل فاژمیدی کلون شده و سپس بیان گردید. همچنین اختصاصیت آن توسط آزمون وسترن بلاتینگ بررسی شد. طبق نتایج حاصله ژن scfv با موفقیت ساخته شد. سپس کلونینگ و بیان آن انجام پذیرفت. در نهایت اختصاصی بودن آن نسبت به مارکر توموری کارسینوامریونیک، با وسترن بلاتینگ تائید گردید.بحث: آنتی بادی نوترکیب scfv بیان شده در این پژوهش، علی رغم کاهش اندازه، به طور اختصاصی قادر به شناسی آنتی‌ژن بود و از این‌رو می‌توان از آن در تشخیص و پایش برخی سرطان‌ها استفاده نمود. در مجموع ، از این روش می توان برای سنتز آنتی بادی های نوترکیب نوع scfv علیه سایر آنتی ژن‌ها استفاده کرد و از آن‌ها در تست‌های مختلف تشخیصی و درمانی بیماری‌ها استفاده نمود.

cloning and expression of recombinant scfv monoclonal antibody against carcinoembryonic antigen

recombinant antibody technology has revolutionized the production and use of these kinds of antibodies and removed some of the hybridoma technology limitations. monoclonal antibodies have high potential as diagnostic and therapeutic agents, especially in targeting cancer cells, but their use has been limited due to their large size. the special structure of different regions of antibodies allows to divide them into efficient subunits, which can combine to form new molecules with efficient properties. due to the reduced size of scfv molecules compared to the primary antibody, they have many advantage. the most important of which is the reduction of immune compare to complete mouse antibodies due to the lack of constant fragments. in this study, the variable regions of gene carcinoembryonic tumor marker monoclonal antibody were constructed as scfv and cloned into the phagemid vector. then its specificity was investigated by the western blotting test. the scfv gene was successfully constructed. then cloning and expression was performed. finally, its specificity was confirmed by western blotting. the recombinant scfv antibody expressed in this study, due to size change, was able to specifically identify the carcinoembryonic tumor marker, and therefore it can be used in the diagnosis of some cancers. this recombinant antibody was specifically capable of carcinoembryonic tumor marker recognition. therefore, it can be applied to some cancers diagnosis and monitoring. in addition, this method can be used to synthesize scfv-type recombinant antibodies against other antigens. so that they can be used in various diagnostic tests and treatment most of diseases.