|
|
|
|
تثبیت کووالانسی آنزیم پراکسیداز نوترکیب لپیدیوم درابا (ldp) بر روی ساختار آلی-فلزی روی با استفاده از گلوتارآلدئید
|
|
|
|
|
|
|
|
نویسنده
|
فرهادی سودابه ,ریاحی مدوار علی ,مرتضوی مجتبی ,سرگزی قاسم
|
|
منبع
|
زيست شناسي كاربردي - 1401 - دوره : 35 - شماره : 2 - صفحه:108 -125
|
|
چکیده
|
مقدمه: پراکسیداز لپیدیوم درابا (ldp) آنزیمی از کلاس iii پراکسیداز‌های گیاهی می‌باشد که توالی اسیدآمینه‌ای آن با پراکسیداز ترب کوهی (hrp) بیش از 90 درصد تشابه دارد.روش‌ها: در این پژوهش، به‌منظور اتصال محکم ldp به چارچوب آلی فلزی روی (zn mof)، بعد از بیان و تخلیص آنزیم، شرایط تثبیت با استفاده از لینکر گلوتارآلدئید بهینه‌سازی شد و سپس ویژگی‌های فیزیکوشیمیایی، سینتیکی و پایداری آن با آنزیم آزاد مقایسه شدند.نتایج و بحث: بهترین شرایط تثبیت با بازده 67%، در غلظت‌های؛ zn mof 0.02 گرم، آنزیم mg/ml 0.75 و گلوتارآلدئید 1.2 دسی‌مولار به مدت سه ساعت انکوبه‌شدن بدست آمد. نتایج نشان داد که فعالیت ویژه آنزیم تثبیت شده بیش از دو برابر آنزیم آزاد افزایش یافته است و km آن به سوبسترای tmb نسبت به آنزیم آزاد، 49 درصد کاهش یافته است. همچنین پایداری سینتیکی آنزیم تثبیت شده در برابر ph و دما نسبت به آنزیم آزاد کاهش یافت
|
|
کلیدواژه
|
بهینه‌سازی، پایداری، سینتیکی، فعالیت ویژه
|
|
آدرس
|
دانشگاه تحصیلات تکمیلی صنعتی و فناوری پیشرفته, پژوهشگاه علوم و تکنولوژی پیشرفته و علوم محیطی, گروه بیوتکنولوژی, ایران, دانشگاه کوثر بجنورد, دانشکده علوم پایه, گروه زیست شناسی سلولی-مولکولی, ایران, دانشگاه تحصیلات تکمیلی صنعتی و فناوری پیشرفته, پژوهشگاه علوم و تکنولوژی پیشرفته و علوم محیطی, گروه بیوتکنولوژی, ایران, دانشگاه علوم پزشکی و خدمات بهداشتی و درمانی بم, مرکز تحقیقات بیماری‌های غیر واگیر‌دار, ایران
|
|
پست الکترونیکی
|
g.sargazi@gmail.com
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
covalent immobilization of recombinant lepidium draba peroxidase on zinc metal-organic framework using glutaraldehyde
|
|
|
|
|
Authors
|
farhadi soudabeh ,riahi-madvar ali ,mortazavi mojtaba ,sargazi ghasem
|
|
Abstract
|
introduction: lepidium draba peroxidase (ldp) belonging to the class iii plant peroxidases that its amino acid sequence shows over 90% similarity with horseradish peroxidase (hrp).methods: in this study, after expression and purification of ldp, its immobilization conditions were optimized on the zinc metal organic framework (zn mof) using glutaraldehyde as a cross linking agent for firm binding. then physicochemical properties, kinetic parameters and stability of the immobilized enzyme were compared with the free one. results and discussion: the best conditions for enzyme immobilization with 67% yield were optimized at concentration of 0.02 g of zn mof, 0.75mg/ml and 1.2 dm of glutaraldehyde, after 3h incubation. the results showed that the specific activity of the immobilized enzyme increased more than doubled that of free enzyme and its km was reduced by 49% compared to the free one for tmb substrate. also its kinetic stability reduced against ph and temperature in compared to the free enzyme.
|
|
Keywords
|
kinetics ,optimization ,specific activity ,stability
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|