|
|
|
|
بیان افزایش‌یافته پروتئین نوترکیب اکتیوین A با استفاده از محیط کشت بهینه‌سازی شده
|
|
|
|
|
|
|
|
نویسنده
|
حاجی حسن زهرا ,نظری نوید
|
|
منبع
|
زيست شناسي كاربردي - 1398 - دوره : 32 - شماره : 2 - صفحه:37 -49
|
|
|
|
|
چکیده
|
امروزه پروتئین اکتیوین a به دلیل کاربردهای بالینی فراوان در درمان زخم و بیماری‌های تحلیل عصبی، در میزبان‌های بیانی متفاوتی به صورت نوترکیب تولید شده است. از آنجاکه یکی از راه‌های افزایش تولید، رسیدن به تراکم سلولی بالا می‌باشد، لذا بهینه‌سازی محیط کشت ضروری به نظر می‌رسد. بدین منظور در این پژوهش غلظت عصاره مخمر و گلیسرول به عنوان منابع نیتروژن و کربن محیط کشت با استفاده از روش آماری rsm (روش سطح پاسخ)، برای دست‌یابی به بالاترین تراکم سلولی باکتری (de3) 21bl e. coli ترانسفورم شده با وکتور activin a : pet21a بهینه‌سازی شد. همچنین تاثیر نمک کلرید منیزیوم (mgcl2) بر روی میزان رشد باکتری مذکور مورد بررسی قرار گرفت. نتایج حاضر نشان‌دهنده بالاترین تراکم سلولی (رشد) در غلظت 42/5گرم بر لیتر عصاره مخمر، 22/5گرم بر لیتر گلیسرول، 30 میلی‌مولار نمک mgcl2 می‌باشد. به‌علاوه نتایج دات بلات و آنالیز با نرم‌افزار image j در این مطالعه نشان داد که میزان بیان پروتئین اکتیوین a نوترکیب در شرایط بهینه‌شده نسبت به محیط کشت پایه افزایش قابل توجهی داشته است.
|
|
کلیدواژه
|
اکتیوین A، عصاره مخمر، گلیسرول، Mgcl2
|
|
آدرس
|
دانشگاه تهران, دانشکده علوم و فنون نوین, گروه مهندسی علوم زیستی, ایران, دانشگاه تهران, دانشکده علوم و فنون نوین, گروه مهندسی علوم زیستی, ایران
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Increased expression of recombinant activin A using optimized cell culture medium
|
|
|
|
|
Authors
|
Nazari Navid ,hajihassan zahra
|
|
Abstract
|
Nowadays recombinant activin A has been produced in different expression hosts because of its vast clinical applications. As obtaining the highest cell density is one way to increase the production, optimization of cell culture medium is necessary. So in this study, glycerol and yeast extract concentration as carbon and nitrogen sources of medium was optimized by using RSM (response surface methodology) in order to achieve the highest cell density of E. coli DE3) 21BL) strain transformed with pET21a:activin A vector. Furthermore, the effect of MgCl2 on the growth of mentioned bacterium was studied. The results showed that the highest cell density (growth) was achieved in 42.5 g/L of yeast extract, 22.5 g/L of glycerol and 30 mM of MgCl2. Also, dot blot results and data analysis with Image J in this study showed that the expression level of recombinant activin A in the optimized medium has been increased in comparison to standard cell culture medium.
|
|
Keywords
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|