شناسایی مورفولوژیک و مولکولی آسپرژیلوس‌ های جدا شده از بیماران بر اساس تعیین توالی ژن بتا توبولین (β-tubulin)

مقدمه: گونه های آسپرژیلوس عامل پاتوژن فرصت طلب در افراد دارای ضعف سیستم ایمنی می باشند. این قارچ ها از جنبه های مختلف بیماریزایی و توکسین زایی حائز اهمیت هستند. هدف مطالعه حاضر، ارزیابی ژن بتاتوبولین در تشخیص و تعیین گونه های بالینی آسپرژیلوس به روش تعیین توالی، در مقایسه با خصوصیات مورفولوژیک (مانند شکل کونیدی ها در آزمایش مستقیم، شکل کلنی در کشت و تست های فیزیولوژیک) می باشد.مواد و روش ها: در این مطالعه 465 بیمار مراجعه کننده به آزمایشگاه شفای اصفهان، مورد بررسی قرار گرفتند. شناسایی مورفولوژیک و مولکولی نمونه های بالینی، به ترتیب با استفاده از کشت بر روی محیط های سابورو آگار، مالت اکسترکت آگار و چاپکس آگار، مشاهده میکروسکوپی نمونه ها و تقویت ژن بتا توبولین و تعیین توالی ناحیه مذکور انجام گردید. سکانس ها از طریق مقایسه با اطلاعات موجود در بانک ژنی آنالیز شدند. یافته ها: از 465 مراجعه کننده مشکوک، 39 مورد بیمار (8%) شناسایی شد. بیشترین جدایه ها مربوط به گونه فلاووس (56%)، اوریزآ (20%) و فومیگاتوس (10%) بودند. 59% بیماران زن و 41% مرد بودند.بحث و نتیجه گیری: در مقایسه با تست های فنوتیپیک، تعیین توالی ژن بتا توبولین برای شناسایی جدایه های بالینی آسپرژیلوس در سطح گونه بسیار با ارزش است. جایگزینی روش های مولکولی با روش های فنوتیپیک و تشخیص دقیق میکروارگانیسم به منظور درمان موثر به محققان این عرصه توصیه می گردد.

Identification of morphological and molecular Aspergillus species isolated from patients based on beta-tubulin gene sequencing

Background: Aspergillus species are opportunistic pathogens among immunocompromised patients. In terms of pathogenesis and mycotoxin production, they are in great value. The aim of the this study was to evaluate of betatubulin gene for identification of clinical Aspergillus species by PCRsequencing method compared to morphological features of clinical isolates (such as conidial shape in direct microscopic examination, colony shape in culture, and physiological tests).Materials and Methods: In this study, 465 patients referred to the Shefa laboratory of Isfahan were evaluated. Morphological and molecular identification of clinical samples were performed using culture on sabouraud agar, malt extract agar, czapekdox agar, direct microscopy, and PCRsequencing of beta tubulin gene, respectively. Sequences were analyzed in comparison with gene bank data.Results: Thirty nine out of 465 suspected cases (8.4%) had aspergillosis. The most prevalent species were Aspergillus flavus (56.4%), A. oryzae (20.5%), and A. fumigatus (10.2%), respectively. Fifty nine percent of patients were females and 49% were males.Conclusion: In comparison with phenotypic tests, sequencing of betatubulin gene for identification of Aspergillus species is at great value. Replacement of molecular techniques with conventional tests is recommended for precise identification of microorganism for better management of infection.