|
|
|
|
تولید رده سلولی ناک اوت Idua توسط تکنیک ویرایش ژنی Crispr/Cas
|
|
|
|
|
|
|
|
نویسنده
|
حاتمی بردر علی ,عظیمی نژاد محسن ,جعفری نیا مجتبی ,گودرزی حمید رضا ,مجرد مجید
|
|
منبع
|
يافته - 1399 - دوره : 22 - شماره : 4 - صفحه:162 -169
|
|
|
|
|
چکیده
|
مقدمه: موکوپلی ساکاریدوز تیپ (mpsi) i بیماری شایع ذخیره ای لیزوزومی است که به واسطه کمبود آنزیم آلفاال - ایدورونیداز (idua) بر روی کروموزوم 4 (4p16.3) ایجاد می گردد. این آنزیم در تجزیه گلیکوزآمینوگلیکانها یا موکوپلی ساکاریدهای درماتان سولفات و هپاران سولفات دخالت دارد و نقص در آنزیم مذکور منجر به افزایش سطح گلیکوز آمینو گلیکان ها (gag) در خون و تجمع آن در اعضای مختلف بدن می شود. این ترکیبات پروتئوگلیکانی زیربنای ساختاری ماتریکس خارج سلولی و ساختار غضروفی نقاطی مثل مفاصل، دریچه های قلبی را فراهم می نماید؛ بعلاوه در تنظیم ارتباطات سلولی نقش دارد. در این مطالعه ما سیستم crispr/cas را طراحی کردیم که ژن کد کننده انزیم idua را مورد هدف قرار داده است و ما توانستیم سلوهای ناک اوت این ژن را تولید کنیم.مواد و روش ها: ابتدا sgrna هدف iuda در پلاسمید px335 کلون شد، با استفاده از نقشه برداری محدودکننده، پلاسمید نوترکیب تایید شد. سپس پلاسمید نوترکیب به رده سلولی اپیتلیال انسانی، hek293 ترانسفکت شد. کلون های جهش یافته توسط آنالیز melting غربالگری شدند و جهش آنها با تعیین توالی سنگر مشخص شد.یافته ها: هضم آنزیمی و تعیین توالی سنگر، القای جهش ایندل را در دو کلون هتروزیگوت و یک کلون هموزیگوت تایید کرد.بحث و نتیجه گیری: در این مطالعه، ما با استفاده از سیستم crisprcas9 یک مدل سلولی سندرم هورلر تولید کردیم که این مدل می تواند جهت استفاده در رویکرد های درمانی این بیماری استفاده شود.
|
|
کلیدواژه
|
سندرم هرلر،Crispr-Cas ژن ناک اوت، .Idua
|
|
آدرس
|
دانشگاه آزاد اسلامی واحد مرودشت, گروه زیست شناسی, ایران, دانشگاه علوم پزشکی نیشابور, گروه علوم پایه پزشکی, ایران, دانشگاه آزاد اسلامی واحد مرودشت, گروه زیست شناسی, ایران, دانشگاه آزاد اسلامی واحد مرودشت, گروه زیست شناسی, ایران, دانشگاه علوم پزشکی مشهد, دانشکده پزشکی, گروه ژنتیک پزشکی, ایران
|
|
پست الکترونیکی
|
mojaradm@mums.ac.ir
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Generation of IDUA knockout cell lines by CRISPR/Cas mediated genome editing
|
|
|
|
|
Authors
|
Hatami bardar Ali ,Goodarzi Hamid reza ,Mojarrad Majid ,Azimi nejad Mohsen ,Jafarinia Mojtaba
|
|
Abstract
|
Background: The hurler syndrome is the most common form of lysosomal storage diseases (LSDs). In the present experiment, we intended to generate an IDUA targeting CRISPRCas system and deactivate the target gene using it.Materials and Methods: IUDA targeting sgRNA pair were cloned into the px335 plasmid and resulted plasmid identity was confirmed using restriction mapping. Recombinant plasmid was transfected into the human epithelial cell line, HEK293. Mutated clones were screened by melting analysis and their mutation was characterized by Sanger sequencing.Results: Analytical digestion and Sanger sequencing confirmed indel mutation induction in two clones in heterozygote and one clone in homozygote state.Conclusion: In this study, we produced an IDUA knockout cell model using CRISPRnCas9 system. This model can be used in the therapeutic approaches of this disease.
|
|
Keywords
|
Hurler syndrome ,CRISPR-Cas ,Gene knock out ,IDUA ,CRISPR-Cas ,IDUA
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|